免疫检测技术及其应用研究.pdfVIP

20 基础微生轴学 免疫检测技术及其应用 陆茂林 (江苏省微生物研究所) l免疫检测技术简介 J．I 基本概念 免疫学是研究机体免疫系统的组织结构及其生理功能的科学。免疫系统的重要生理功 能就是对“自己”和“非己”抗原的识别及应答．从而担负着机体免疫防御、免疫监视及免疫自 稳的功能。人粪应用免疫学方法预防传染病的历史，可“追溯到16世纪中国医学家用人痘 苗预防天花的伟大实践。此后，免疫学经历了免疫学经验时期、经典免疫学时期、近代免疫学 时期．从本世纪60年代起，进入了现代免疫学的发展阶段。免疫学与生物学、基础医学、临床 医学和预防医学等学科有着密切的联系．它的发展与渗透促进了生物学和医学的发展。19 世纪，免疫学在抗感染方蔚取得了巨大成功，促进了生物制品产业的发展。过去几十年里．用 细胞工程产生的单克隆抗体，用基因工程产生的细胞因子为临床医学提供了一大类具有免 疫调节作用的新型药物。除此之外．免疫学的发展与应用，也产生并形成了一类检测技术 ——免疫检测技术，极大地丰富了检测技术和手段。 免疫检测技术是指利用抗原抗体间的特异性反应原理为基础来对某种物质进行定性或 定量测定～种方法．该方法是五、六十年代出现的一种新的检测技术，起初主要用于临床检 测，如测定体液中的蛋白质、人体激素、细菌毒素、病源体抗原等，该方法经过三十多年的不 断改进与完善，已成为一种不可替代的普遍运用的分析方法．并于七十年代柬开始应用于食 品卫生分析检测，经过二十几年的努力探索，取得了显著进展，从整体上提高了食品卫生分 析方法的技术水平。 1．2免疲检测技术简介 1．2．1放射免疫分析(radioimmuno--assay，RIA)RIA是Ya[owBerson于1956年剖 立的一种体外微量分析法，它将具有高度灵敏度的放射性核紊示踪技术和特异性免疫化学 技术结合而建立的新方法。由于本法具有灵敏度高．特异性强，精密度佳，适用范围广(几乎 一切具有话性的物质均可用此法测定)，因此已广泛应用于内分泌学、药物浓度、肿瘤标志 物、分子生物学研究。 迎接21世纪西部大开发暨微生特教学科研和成果产业化研讨喜 21 1．2．2酶免疫检测技术(Enzyme 项将酶反应的高效性与免疫反应的专一性有机结合起来的检测技术。 1．2．3免疫荧光技术(Immuno--fluorescencetechnique)免疫荧光技术是将抗体或抗原 标记的荧光索，与相应抗原或抗体结合，在荧光显微镜或紫外线照射下，呈现荧光现象的一 种特异免疫荧光方法。本法结合了免疫学反应的特异性以及在黑暗背景中发光物质易被发 现的敏感性优点．因而能准确检测少量的抗原或抗体成分在组织细胞内的定位分布。 免疫荧光技术分析必须具备荧光家、标记蛋白质和荧光检测仪三个条件．Riggs在1958 萤光索二氯三嗪基氨基萤光素(DTAF)。用于检测萤光的仪器有萤光显徽镜、萤光分光光度 计及流式细胞仪(高级精密仪器)。 技术，Siger于1959年首创此技术，它将电子显徽技术与免疫细胞化学技术相结合．从而能 在电镜下直接对抗原或抗体在分子水平上进行定位。由于它是分子水平上的定位技术，与定 量分析检测有所区别，不多叙述。 1．2．5免疫肢体金标记技术(Immunocolloidal--gold 金为标记物，利用特异性抗原抗体反应，在光镜、电镜下对抗原(或抗体)物质进行定位、定性 乃至定量研究的标记技术。胶体金是金的水溶胶(氯金酸的水溶液)，是一种带负电荷的疏水 胶体溶液，胶体金可通过静电吸引及其表面的物理特性，能与多种生物大分子结合，形成蛋 白质——金颗粒复合物，即肢体金标记物(胶体金探针)，它已成为继萤光素、酶等标记技术 之后的一种新的标记技术，其在生物学和医学研究领域(如诊断试剂)中已成为一种非常有 用的研究手段． 在过去的10年中，各国的诊断试剂研制人员应用此技术开发出许多种使用方便的悼外 诊断试剂，如最早面市的早早孕(HCG)测试盒在国内外均得到极为广泛的应用，为千百万 育龄妇女带来了极大的方便．目前市场上有数十种胶体金技术产品，涉及恶性肿癌、病毒性 感染、细菌性感染的诊断及毒品和环境污染物的快速检测． 2酶免疫测定技术及其应用 2．1醇免疲技术的基本概念和基本原理 2．1．I