第22章 免疫学检测23章免疫学防治PPT.ppt

免疫系统;;实验课内容;第一节　体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素;（一）特异性和交叉反应 特异性：一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合。 分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性 。 ;前带现象（prozone）和后带现象(postzone) Ab过剩和Ag过剩　;比例合适： 若抗原、抗体的数量比例合适，抗体分子的两个Fab段分别与两个抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，则反应体系中基本不存在游离的抗原或抗体，此时形成肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物）。因此，确定反应体系中抗原、抗体的最适比例十分重要。;抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。在一定条件下（如低pH、高浓度盐、冻融等），抗原-抗体复合物可被解离。解离后的抗原和抗体仍保持原有理化特性和生物学活性。根据此特点，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。;（一）电解质 抗原和抗体有对应的极性基团，能相互吸附并由亲水性变为疏水性。电解质的存在使抗原-抗体复合物失去电荷而凝聚，出现可见反应，故免疫学试验中多用生理盐水稀释抗原或抗体。;（二）酸碱度 抗原抗体反应的最适pH是6-8。 （三）温度 最适温度为37℃。有些例外，如冷凝集素在 4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。; （四）抗原和抗体的性质 抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。 此外，抗原理化性质、抗原决定基多寡和种类等均可影响抗原-抗体反应。 ;抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定基之间的结合能力; 一个抗体分子与整个抗原分子间的结合强度 ; 根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分等因素分类： （一）凝集反应 （二）沉淀反应 （三）补体参加的反应 （四）免疫标记技术;颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应(agglutination) 。 ;1．直接凝集（direct agglutination) ： 细菌或红细胞与相应抗体直接反应，可出现细菌或红细胞凝集现象。 2．间接凝集（indirect or passive agglutination) ：检测针对可溶性Ag的Ab 3．间接凝集抑制试验 (direct agglutination inhibition test) 4. 协同凝集试验（co-agglutination test）; 直接凝集反应;; 间接凝集反应;载体;间接凝集抑制试验（妊娠试验）;;免疫妊娠试验（1）;免疫妊娠试验（2）;各种凝集反应示意图;Ag-Ab反应的基本检测方法 （一）凝集反应 （二）沉淀反应 （三）补体参加的反应 （四）免疫标记技术;Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。 该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。;1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) 3．免疫电泳(immunoelectrophoresis) 4．免疫比浊(immunonephelometry) ;单向免疫扩散(single immunodiffusion);双向免疫扩散(double immunodiffusion) ;单扩与双扩原理;　Ag-Ab反应的基本检测方法 （一）凝集反应 （二）沉淀反应 （三）补体参加的反应 （四）免疫标记技术;用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。; 此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光，借此对抗原进行定性或定位。 ;（1）直接荧光法：荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。该法优点是特异性高，缺点是检查任一抗原均须制备相应荧光抗体。 （2）间接荧光法：用一抗与标本中抗原结合，再用荧光素标记的二抗进行检测。该法优点是敏感度比直接法高，制备一种荧光素标记的二抗即可用于多种抗原的检测,但非特异性反应亦增强。;免疫荧光法图示;Mouse kidney section;Control; 此法将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，借助酶作用于底物的显色反应判定结果。应用酶标测定仪测定光密度（OD）值可反映抗原含量，灵敏度达ng/ml甚至pg/ml水平