基因操作技术02.pptVIP

酶切 酶切 连接 ...GAATTC... ...CTTAAG... ...G ...CTTAA AATTC... G... EcoRI 基因克隆的技术路线 酶切 酶切 连接 ...GAATTC... ...CTTAAG... ...G ...CTTAA AATTC... G... EcoRI 基因克隆的技术路线 酶切 酶切 连接 转化 ...GAATTC... ...CTTAAG... ...G ...CTTAA AATTC... G... EcoRI 基因克隆的技术路线 酶切 酶切 连接 转化 筛选 ...GAATTC... ...CTTAAG... ...G ...CTTAA AATTC... G... EcoRI 基因克隆的技术路线 亚克隆 初步克隆中的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的DNA片段，在诸如表达序列分析和突变等操作中不便进行，因此必须将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆” 基因操作与DNA的化学操作的差异 * 建设历程 * 强调重要性；重要但不是目的，而是手段 * 培养的是科学家或工程师，而不是技术操作工。对于学生就业的目的：为科学研究提供理论知识和设计思路；为创业提供高新技术视野和眼光；为大众提供现代科普知识。 * * * 基 因 操 作 原 理 Principles of Gene Manipulation 联系方式： /kech/jycz/index.htm Tel: (office) (home) E-mail: m98sun@ 孙 明 一、什么是基因操作 核心部分为cloning 大多数西方国家对此都有一个精确的法律定义，(由于政府的法律约束),在英国将基因操作定义为 “Principles of Gene Manipulation”, Black Well Scientific Publications, RW. OLD SB Primrose, 1985-2001. The formation of new combinations of heritable material by the insertion of nucleic acid molecular, produced by whatever means outside the cell, into any virus, bacterial plasmid or other vector system so as to allow their incorporation into a host organism in which they do not naturally occur but in which they are capable of continued propagation. 将在细胞外产生的核酸分子 插入病毒, 质粒或其它载体系统中 再整合到那些本来不含该类物质的宿主中 从而形成一种新的可连续繁殖的有机体 强调 外源核酸分子(一般为DNA)在不同宿主中的繁殖 打破自然种的界限 将来自不相关物种的基因放入一个宿主中 基因操作的重要特征: 基因转移 另一个特征是繁殖 概念的延伸: 个体内部基因的增加(knock in)或减少(knock out) 20世纪是生物学发展最为迅速的时期，由于遗传学的兴起与发展，DNA作为生命遗传信息的物质基础被确定下来，从而导致分子生物学的诞生。 1953年由于认识了DNA的双螺旋结构，从而掀起了分子生物学研究的热潮。 1. 作用 从整个生物学研究进程或研究层次来说，其发展过程涉及到个体、组织器官、细胞、亚细胞水平，分子水平 从技术手段来说涉及遗传学、生物化学，以及组学(-omics) Genomics Proteomics Environomics metabomics 基 因 操 作 分子生物学严格来说应是从分子水平或核酸水平上进行阐述的生物学，研究生物的生物学现象和本质，如DNA的结构复制、表达、调控、遗传、变异等。 由于分子生物学的进一步发展，生物学的各个分枝学科都延伸到了分子水平 传统分子生物学就是一个包罗万象的学科，大的可以说动、植、微生物的分子生物学，小的可以说某些物种的分子生物学，如水稻分子生物学、玉米分子生物学、芽胞杆菌分子生物学。 2. 宏观位置 从学科发展的角度来看，传统的分子生物学就好象是高级生物化学，阐述基因或者说DNA（核酸）的静态和动态化学本质 当代分子生物学正朝着发育、结构和遗传生物学的方向发展，为深层次阐明生命的现象和本质以及以及应用服务 如果说传统的分子生物学是静