第五章 分子克隆常用的工具酶.ppt

基因工程的基本程序 载体质粒 外源DNA片段 外源DNA插入 剪切 引入宿主细胞 选出含有重组DNA的细胞扩增表达 a b b A A b 第五章?????? 分子克隆常用的工具酶 第一节??????? 限制性核酸内切酶与DNA分子的体外切割 第二节??????? DNA连接酶和DNA分子的体外连接 第三节??????? 其他工具酶 第一节??????? 限制性核酸内切酶与DNA分子的体切割 限制性核酸内切酶，是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。 一、寄主控制的限制与修饰作用如图5-1，图5-2 二、限制性核酸内切酶的制备方法 三、限制性核酸内切酶分类和命名 四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 五、影响限制性内切酶活性的因素 分类： Ⅰ Ⅱ Ⅲ ⅠⅢ ：识别位点附近切割DNA，切割位点难以预测。 Ⅱ ：能在识别位点处切割DNA，切割位点固定 四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 识别序列 ：1.4~7个核苷酸组成的特定核苷酸序列 2.回文结构：两个顺序相同的拷贝在DNA链上呈反向排列。 EcoRⅠ 5 ’-G AATTC-3 ’ 3 ’-CTTAA G