植物组织培养第二章.ppt

第二章 植物组织培养的基本原理 植物细胞全能性理论是植物组织培养的核心理论。 离体细胞具有生命的特征属性，在全能性的基础上，提供合适的营养和环境条件，离体细胞经历脱分化和再分化过程 第一节 植物细胞全能性和细胞分化 一、植物细胞全能性 差异：（1） 受精卵的全能性最高 （2） 受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。 潜在全能性的原因：基因表达的选择性 科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。 人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。 二、植物细胞分化 分化：植物体各个部分出现异质性的现象，可以在细胞水平、组织水平或器官水平上表现出来。 细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在的发育方式改变的过程。 细胞分化是组织分化和器官分化的基础，是离体培养再分化和植株再生得以实现的基础。 第二节 离体条件下植物器官的发生 一、脱分化和再分化 脱分化（dedifferentiation)：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。 再分化（redifferentiation):离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株，这个过程称为再分化。 第二节 离体条件下植物器官的发生 一、脱分化和再分化 类型： 细胞水平的再分化 组织水平的再分化 器官水平的再分化：器官型和器官发生型 植株再生：先芽后根、先根后芽、芽根同时 二、影响细胞脱分化和再分化的因素 （一）影响细胞脱分化的因素 1、损伤 2、生长调节剂 3、光照 4、细胞位置 5、外植体的生理状态 6、植物种类差异 （二）影响细胞再分化的因素 因素：（同上） 原因：1、不同植物种类再分化能力差异很大 2、对某些植物的植物再生条件还没有完全掌握 三、愈伤组织培养 （一）愈伤组织形成、生长和保持 1、愈伤组织的形成 在脱分化过程中，大多数情况下形成愈伤组织。愈伤组织的结构往往是异质的，无明显极性，其形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。 1）诱导期（启动期）：是愈伤组织形成的起点。 是指细胞准备进行分裂的时期。 2）分裂期：外植体的外层细胞出现了分裂，中间细胞常不分裂，故形成一个小芯。由于外层细胞迅速分裂使得这些细胞的体积缩小并逐渐恢复到分生组织状态，细胞进行脱分化。 特征：细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，颜色浅而透明。 3）分化期：停止分裂的细胞发生生理代谢变化而形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织，在细胞分裂末期，细胞内开始发生一系列形态和生理变化，导致细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。 2、愈伤组织的生长 诱导期后，外植体外层细胞开始出现分裂，在组织受伤表面形成一种创伤形成层，愈伤组织的细胞数目迅速增多。 愈伤组织在生长过程中的生理生化变化： 1）在诱导期和分裂始期，每个分裂细胞中的RNA含量迅速增加，并达到一个高峰，但在继续分裂的过程中，RNA的含量减少。 2）同工酶谱发生变化。 3）连续继代培养可能改变次生物质的积累水平或能力。 4）延长培养期可能使愈伤组织对生长素的需求发生变化，导致生长素的自给和自养，出现驯化现象. 2、愈伤组织的生长 愈伤组织的质地明显不同，有松脆和致密两种类型，但它们之间是可以相互转变的。 一般加入较高浓度生长素，可使致密的愈伤组织变的松脆；而降低或去除生长素或加入高浓度的细胞分裂素，往往使愈伤组织变的致密。 3、愈伤组织的保持 大多数情况下，随继代培养代数的增加和培养时间的延长，愈伤组织表现出生长势下降、褐变、分化和形态发生能力逐渐降低甚至死亡或形态发生能力完全丧失。 这种情况的发生主要是遗传和生理因素所致。前者包括染色体畸变、基因突变等；后者是细胞或组织内激素平衡的改变或细胞对外源生长物质的敏感性的改变。因生理因素导致的形态发生能力下降可通过改变培养条件而得以改善。 （二）愈伤组织形态发生 愈伤组织生长过程中，开始细胞分裂局限在外层细胞，当表面细胞逐渐减慢并停止时，内部较深处的细胞才开始分裂，且分裂的方向也发生改变，形成维管化组织和瘤状结构，这是愈伤组织生长的一个共同特征。 由愈伤组织再分化的形态发生方式也有体细胞胚胎发生和器官发生两种，后者具体包括:先芽后根；先