4-Bio-Rad凝胶成像分析仪精选.ppt

Bio-Rad凝胶成像分析仪 2013.07 主要内容 仪器组成成份介绍 软件操作界面介绍 软件应用介绍 1、仪器基本组成 仪器各组成部分介绍 1.1 控制面板 1.2 背面开关及保险丝 1.3 镜头 2、基本软件操作界面 软件操作界面 3、软件基本程序应用 3.1 建立图像获取程序 3.2.1 将凝胶放入仪器盘里，关好仪器门→点击“放置凝胶” →通过照相机缩放调节图像的大小或打开仪器门，挪动电泳胶，使其处于合适的成像位置→点击运行实验协议即可成像 3.2.2 此时可以点击主窗口工具栏的“快照”或“保存”，分别保存照片和软件格式，一边日后查看或分析。 3.3 图像分析 3.3.2.2 点击“泳道和条带”，在“泳道”选项下可以进行泳道检测器的“自动”和“手动选择”，可以对“所有泳道”或“单个泳道”进行相关的操作；在“条带”选项下，可以进行“条带的检测”，以及条带的“添加”、“删除”、“调整”。 3.3.2.5 定量工具 3.3.2.5 定量工具——“绝对定量” 通过选择已知标准品浓度的条带（至少两个以上，以R表示），并设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标条带的绝对浓度，具体数据可以查看分析表。 3.3.2.6 注释工具 3.3.2.7 手动定量工具/体积工具 谢 谢！ * * 镜头及滤光片位置 控制面板 紫外透射平台 Universal Hood电源开关 相机镜头 滤光片 主窗口工作列 分 析 工 具 列 状态列 程序桌面 启动精灵 2.1 主窗口工具列 2.2 显示工具列 图 像 显 示 设 定 放 大 缩 小 全 窗 口 大 小 亮 度 明 暗 度 转 换 改 变 图 像 色 彩 转 换 3D 成 模 式 像 图 像 信 息 2.3 分析工具列 图像工具 泳道及条带工具 分子量工具 自动定量工具 注释工具 手动定量工具 双击 选择“新建实验协议” 3.1.1 在应用程序下，选择各种成像模式， 包括核酸凝胶、蛋白质凝胶、印迹及自定 义等 3.1.2 在成像区域项下，选择凝胶的类型 及图像区域。 3.1.3 在图像曝光、显示选项下，可以 手动或自动设置曝光时间，是否高亮显 示饱和像素及显示图像色颜色。 3.2 成像 3.3.1 自动分析 点击左侧“分析工具箱”下方的“自动分析”，进行“检测设置”和“分子量分析设置”， 点击“确定”，完成对图像的自动分析。 3.3.2 手动分析 3.3.2.1 点击左侧“分析工具箱”下方的“图像工具”，可以对图像进行“水平”和“垂直”的翻转，“向左90°”、“向右90°”和“自定义”的旋转，以及“裁切”、“逆变数据”、“合并”等操作。 3.3.2.3 分析完毕后，点击主窗口工具栏的“分析表”，显示分析结果。同时“分析表” 上方的选项可以调整“分析表”的显示项，及保存成Excel或文件的格式等。 显 示 数 据 选 项 更 改 分 析 表 方 向 将分 析表 复制 到剪 切板 将分 析表 导出 到文 件 将分 析表 导出 到EXCEL 3.3.2.4 分子量分析 点击“分析工具箱”中的“MW分析工具”，在标准项下，点击“更改”，选择 所需的“分子量标准”，选择“标准泳道”，点击“分析表”，即可查看所要检测的 蛋白的分子量，通过“主窗口工具栏”的“标准曲线”查看标准曲线、“报告栏”查 看报告。 定量工具包括“相对定量”和 “绝对定量” 。在“相对定量”里我们选用泳道5的1号条带为参考条带，其被定义为“1”，其余条带依次得出相对结果。 可以通过注释工具增加文字批注及箭头批注， 并可调整批注相对位置、文字属性、颜色及 旋转方向等参数。 按下“矩形”、“圆形”、“徒手画”选择较合适的条带 型态，选取想要定量分析的条带位置，并在条带上点 击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景 空白，并分别定义其定量依据（如kb、ppm、mg/ml…）。 背景扣除方法里的“局部”是通过我们所圈选的未知 条带和标准条带的像素密度总和来进行背景值的扣抵； “全局”是通过整张胶（膜）的背景平均的密度来进行背 景值的扣抵。 *