DNA重组技术的基本工具PPT课件.pptVIP

　 现在已经从约300种微生物中分离出与约4000种限制性内切酶(限制酶)。 　 三、基因的载体——“分子运输车” （2）噬菌体的基本特征 ——一类能够特异性侵染细菌的病毒，结构简单。 比较：DNA连接酶与DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 作用底物 模板 相同点 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 1、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去（携带重组DNA分子）。 2、能够使外源基因复制和表达的工具。 载体必须具备的条件： 2、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 3、对受体细胞无害 　问题：霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 问题：目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 4、有某些标记基因，便于筛选； 5、结构简单，大小适中 能复制并带着插入的目的基因一起复制 是切割和插入位点 有标记基因 （1）质粒——是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 实际操作的质粒一般都是人工改造过的 能够在宿主细胞内 独立的复制而实现扩增 将自己插入到宿主细胞染色体中来进行复制 * * * * * 专题1 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程 对基因工程的概念的理解 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获得人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的理论依据 1. DNA是绝大多数生物的遗传物质， ——部分病毒的遗传物质是RNA， 其他生物的遗传物质是DNA 都由4种脱氧核苷酸聚合而组成 DNA具有双螺旋结构 不同生物的DNA基本单位和结构相同 脱氧核糖 磷酸 含氮碱基 脱氧核苷酸 碱基对 氢键 磷酸二酯键 基本骨架 DNA的基本结构 2. 中心法则： DNA RNA 蛋白质（性状） 复制 转录 翻译 逆转录 复制 在绝大多数生物中， 亲代DNA通过复制而将遗传信息传递给子代； DNA通过控制蛋白质合成而控制个体性状表达 基因工程的理论依据 3. 基因是遗传物质结构和功能的基本单位 基因是指有遗传效应的DNA片段 一个DNA分子上有多个基因 基因工程的理论依据 4. 各种生物共用一套遗传密码 ——相同的DNA碱基序列,在不同生物细胞中翻译出相同的蛋白质，表达为相同的性状; 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 达尔文提出生物进化论 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 孟德尔提出基因的分离定律和自由组合定律 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 摩尔根证明基因在染色体上， 并提出基因的连锁互换定律。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 艾弗里证明DNA是遗传物质，DNA可 从一种生物个体转移到另一种生物个体。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 沃森、克里克提出DNA的双螺旋结构模型。 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 梅塞尔松、斯塔尔证明DNA的半保留复制 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 克里克等提出中心法则 DNA RNA 蛋白质 转录 翻译 逆转录 复制 科技探索之路： 基础理论和技术发展催生了基因工程 早期基础理论 1963年尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的 遗传密码，1966年霍拉纳用实验加以证明。 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 一. 主要来源： — 原核生物中分离纯化出来的一类酶 1、限制酶主要存在原核生物，它有什么意义？ 限制酶在原核生物中主要是切割外源DNA， 使之失效，从而达到保护自己的目的。 二.功能： ——识别特定的核苷酸序列，在特定的部位断裂磷酸二酯键。 （1）识别序列： 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。 （2）切割部位：磷酸二酯键 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 三.作用结果 形成粘性末端或平末端 2、为什么细菌中限制酶不剪切细菌本 身的DNA？ 原核生物中不存在该酶的识别序列或 识别序列已经