若何操纵植物组织造就中褐变的发生_陈凯.docVIP

如何控制植物组织培养中褐变的产生_陈凯 邯郸农业高等专科学校学报2以抖年第21卷第3期第5页 JOURNALOFHANDANAGRICULTURALCOLLEGEZ以科.21(3):5 如何控制植物组织培养中褐变的产生 陈凯刘颖 (河北工程学院农学院,河北邯郸057150) 摘要:揭变在植物组织培养过程中普遍存在,其诱发原因比较复杂,不同植物可采取不同的方法进行防 止戴减轻其发生。 关键词:植物组织培养;揭变;外植体 褐变问题是植物组织培养过程中经常遇 到的问题,已在许多植物的组织培养中发现 此类现象,尤以木本植物的组织培养中更为 常见川。目前还没有一种既定有效的方法来 避免褐变现象的产生。由于褐变的发生对培 养物的危害十分严重,经常导致培养工作的 失败,使之成为植物组织培养工作者极为关 注的焦点,甚至有人认为能否有效地控制褐 变对植物组织培养工作能否成功起关键作 用[z]。笔者通过自己的实践经验及近年来的 相关报道归纳出几种防止或减轻褐变对培养 物伤害的方法,供工作者在进行有关工作者 作为参考。 1褐变的危害 褐变是酚类物质被氧化的结果。外植体 被切割时,切口处的细胞会受到破坏,使得原 来在植物细胞中并不接触的酚类物质和多酚 氧化酶接触,并发生反应,将酚类物质氧化成 棕褐色的醒类物质,导致褐变的产生[3]。褐 变产生的氧化物会使外植体甚至整个培养基 变成褐色,导致外植体的生长和分化受到抑 制,严重时会导致外植体死亡。 2控制褐变产生的方法 实际工作中的许多内因和外因都会导致 褐变的产生,如:外植体的生理状态,培养基 中所添加的植物激素浓度等等。抑制褐变发 生的措施也多种多样,但每种方法都有一定 的适用范围和局限性。可根据不同的植物采 用不同的方法,其中包括对外植体、培养基以 及培养过程中的操作,来防止褐变的发生或 者减轻褐变造成的危害。 2.1对外植体的选择和处理 2.1.1选择适当的外植体 外植体的生理状态是影响褐变产生的原 因之一,在选择时应尽量选取选择生长旺盛 的,分生能力强的部位作为外植体材料。Yu 和Me获月i时4〕从葡萄的侧生蔓切取茎尖进行 培养比从延长蔓切取更容易成活,且前者的 酚类物质含量要比后者少。苹果的顶芽作为 外植体褐变程度轻,且更容易成活。[5] 2.1.2尽量降低外植体的受伤害程度 在进行外植体切割时,应当尽量使外植 体的切口最小,而且伤口的剪切应当尽量平 整,这样可以使外植体的伤口面积最小。同 时,应当注意各种化学消毒剂对外植体的伤 害。消毒的时间和褐变的发生几率一般来讲 成反比,消毒的时间越长,消毒效果越好,但 培养中褐变现象也越严重。因此,对消毒时 间也应严格掌握,既要获得较好的消毒效果, 降低培养中的染菌率,又要兼顾降低褐变情 况的发生。 2.1.3对培养物进行适当的预处理 用抗氧化剂对外植体进行预处理,或直 接在抗氧化剂中进行外植体的切割和剥离等 工作均可有效地防止褐变的发生。 2.1.4接种前的清洗 在接种前用无菌水或消毒剂对外植体进 行多次清洗,这样可以使得外植体切口处的 的酚类物质得到最大限度的稀释,可起到减 收稿日期:2(X又一05一17如何控制植物组织培养中褐变的产生第3期 轻褐变伤害的作用。 2.1.5注意外植体在培养基中的放置方式 虽然目前对培养物的在培养基中的放置 方式能减轻褐变的原因尚不清楚,但在薯茨 的茎段作为外植体的培养中发现,将茎段正 向插人培养基中,则出现严重的褐变现象,而 将茎段倒向插人,则褐变完全消失。 2.2对培养基状态和成分进行调整防止褐变 的产生 2.2.1培养基的状态 在植物组织培养中,根据琼脂的用量不 同,培养基可分为固体培养基、液体培养基和 半固体培养基等。许多实验表明,在这几种 培养基中以液体培养基最易克服褐变的产 生。因为外植体渗出的有毒物质在液体培养 基中可以得到很快的扩散,避免了这些有毒 物质的大量积累,使这些有毒物质的危害减 轻。另外,在固体培养中适当降低培养基的 硬度也可以达到一定防止褐变的效果。 2.2.2培养基中加人抗氧化剂和吸附剂 在培养基中加人抗氧化剂,如:硫代硫酸 钠、V。、间苯三酚、柠檬酸、聚乙烯毗咯烷酮 等。因为抗氧化剂可以改变外植体周围的氧 化还原电势,所以可以对酚类物质的氧化起 抑制的的作用,从而减轻褐变。 活性炭是一种较强的吸附剂,在培养基 中加人适量的活性炭可以吸附有害物质,其 中包括培养物分泌到培养基中的酚、酿类物 质,可有效地防止此类物质所诱发的褐变。 在此应当注意,活性炭除吸附外植体分泌到 培养基中的有害物质外,还会吸附培养基中 的其他物质,如生长调节剂。所以,在应用此 种方法防止褐变的同时,应适当调节培养基 中各种物质的配比,尤其是生长调节剂的浓 度应有所提高。 2.2.3培养基中加人鳌合剂 鳌合剂可与多