核酸凝胶染色剂-GelRed.docVIP

环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed GelGreen-真正的EB替代者 水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成环境污染。 GelRedTM 和 GelGreenTM 是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的，极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。 目前，大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。例如，EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，且染色后背景荧光信号较高（图1）。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I，且毒性依然较高(图3）。GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的 GelRed，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。但与SYBR Gold 不同，GelRed 在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。我们新开发的 GelGreen 可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。GelGreen 无论是在预制凝 胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。实际上，GelRed 和 GelGreen ，特别是 GelRed非常稳定，可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。同样重要的是，GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green 提高了安全性。独立的测试服务公司（Litron Laboratories, Inc.）进行的标准艾姆斯氏测试结果表明，在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的 约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下， GelGreen没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。见图3。相反，SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)），因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。 图1：GelRed 和 EtBr预制胶染色（precast gel staining）对比图。 琼脂糖浓度为1%，缓冲液为TBE。四个泳道的加样量从左至右分别为 200 ng, 100 ng, 50 ng and 25 ng。在300nm紫外灯下成像。结果显示GelRed较 EtBr有着更高的灵敏度和更低的本底色。 图 2. GelGreen （绿色） GelRed （红色）在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱。 图3：分别用1X SYBR Green 1、SYBR Safe、GelRed 和 Gelgreen 在 PBS 缓冲液中对Hela细胞染色5分钟和30分钟。成像结果表明Gelred和GelGreen染色剂几乎没有穿透细胞膜进入细胞内，而SYBR Green 1、SYBR Safe 则完全进入细胞内，并与核酸结合（绿色发光部分）。这充分证明GelRed和GelGreen具有极好的安全性。更详细的安全检测报告可以到 官方网站下载。 特 性: 1、高灵敏度 GelRedTM 和 GelGreenTM 是目前最灵敏的凝胶核酸染料 2、稳定性极好 可随预制胶直接加热而不会降解；室温下可长期保存 3、更安全 艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭,其水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试 4、广泛的适应性 适用于预制凝胶染色和凝胶电泳后染色 5、染色过程简单 预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；电泳后染色也仅需30 分钟，因本底色极低而无需脱色或冲洗 6、对 DNA 和 RNA 的迁移影响极