采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量及酶活性的影响__食品科学工程.docVIP

目录 摘要 1 前言 1 1 材料与方法 2 1.1 材料 2 1.2 方法 2 1.2 .1 病原菌的分离、纯化和保存 2 1.2.2 孢子悬浮液的制备 2 1.2.3硅酸钠浸泡处理果实 2 1.2.4损伤接种 3 1.2.5取样方法 3 1.2.6丙二醛(MDA)含量测定 3 1.2.7 细胞膜完整率的测定 3 1.2.8 细胞膜微膜囊提取、NADPH氧化酶和Ca2+-ATPase活性的测定 4 1.2.9脂氧合酶（LOX）活性测定 4 1.2.10 蛋白含量测定 5 1.2.11 数据统计 5 2 结果与分析 5 2.1硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜完整率及MDA含量的影响 5 2.2硅酸钠处理及挑战接种对果实细胞膜NADPH氧化酶和Ca2+-ATPase活性的影响 6 2.3硅酸钠处理及挑战接种对果实脂氧合酶（LOX）活性的影响 7 3 讨论 7 参考文献 9 致谢 10 采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜细胞膜相关物质含量 及酶活性的影响 摘要：本文研究了100 mM硅酸钠采后处理和粉红单端孢（Trichothecium roseum）挑战接种对对“银帝”厚皮甜瓜果实细胞膜部分氧化还原体系的影响。结果表明：硅酸钠处理明显延缓了甜瓜果实细胞膜完整率的降低，处理后第4d高于同期对照20.7%；明显提高了果实细胞膜NADPH氧化酶，挑战处理后第10d高于同期对照82.4%；延缓了脂氧合酶（LOX）活性的升高，处理后第6d活性低于同期对照10.9%； 丙二醛（MDA）含量有所增加，处理后第10d高于同期对照44.8%。 关键词：硅酸钠 果实 细胞膜 前言 甘肃省是我国厚皮甜瓜的主要产区之一，甜瓜营养丰富、甘甜爽口、风味独特，深受大众喜爱。然而，由于其产期集中，且正值高温季节加之缺乏必要的冷链和有效的包装，采后腐烂颇为严重，造成厚皮甜瓜采后腐烂的主要病害包括黑斑病、白霉病、软腐病、粉霉病等[1]。 果蔬采后病害发生的重要原因是受到病原物侵染时，细胞的膜结构和特性将发生改变，从而引起代谢失调，最终导致细胞死亡。质膜NADPH氧化酶NADPH为电子供体，催化胞外O2生成超氧阴离子的氧化还原酶，通过催化产生AOS，细胞质内Ca2+增加会促进植物组织乙烯合成并加速这些组织的衰老[2-3]。质膜和细胞器外膜的Ca2+-ATP酶能够把细胞质过多的Ca2+转运到细胞外或细胞器贮藏起来。另外LOX能催化多元不饱和脂肪酸发生过氧化作用，LOX及其氧化物可能直接参与了植物组织的衰老过程。 有报道表明硅可以有效降低厚皮甜瓜的采后病害[4-7]。但是对其作用机理的探讨主要集中于硅酸钠处理POD 、PAL和CHT活性Ca2+-ATPase）活性的影响鲜有报道。本实验以厚皮甜瓜为试验材料，研究硅酸钠处理对细胞膜相关物质含量及酶活性的影响，探讨其降低采后病害的机理，以其为硅的进一步扩大使用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 供试“银帝”甜瓜采自甘肃民勤县收成乡露天栽培大田中，花后45天采收。单果套发泡网袋后入标准包装箱（6个/箱）当天运抵实验室后在常温条件下（222℃；RH 55-60%） 病原菌的分离、纯化和保存 1998）。采集典型粉霉病（T roseum）70%酒精表面消毒后切取病健交界处组织，经表面消毒后移至马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基上，于25℃保温培养。待菌落形成后采用稀释法进行单孢分离、纯化。纯化菌株经回接试验确定其致病力后于斜面PDA上4℃下保存待用。 1.2.2 孢子悬浮液的制备 参照Bi et al.（200）25℃下培养10天的带菌PDA平皿一个，加入含0.05% Tween20的无菌水约10mL，用玻璃棒刮下平板上的病原菌孢子，然后转入50mL三角瓶中，在WYX-A微型旋涡混合器上振荡15秒，再用双层纱布过滤，滤液用血球计数板计数算出孢子悬浮液的浓度后，最后稀释至所需浓度，1×106 个/mL。 1.2.3硅酸钠浸泡处理果实 硅酸钠诱导处理：100 mM的硅酸钠(内含0.05%的Tween80)10 min取出晾干后，单果套发泡网袋，入包装箱（6个/箱），于常温（22±2℃；RH55%60%）下贮藏供接种之用。以清水内含0.05%的Tween80处理作对照。损伤接种 参照毕阳和张维一（1993）方法并修改。选取处理后常温贮藏48h的果实，经%酒精表面消毒后，用灭菌铁钉（直径3mm）在果实表面等距离刺孔0个（深3mm）。分别取20μL孢子悬浮液接入孔内。稍作晾干后入包装箱，上覆聚乙烯塑料薄膜（厚0.01mm）保湿，室温(22±2℃；RH85%90%)条件下贮藏。3次。 1.2.5取样方法 参照Bi （2005）方法。分别于处理后0、2、4、6、8、10天用直径5mm打孔器打取皮下-10mm处果肉组织3g。挑战接种样品则取T