抑制HSP90对缺氧肿瘤细胞辐射敏感性的影响.PDFVIP

第30 卷 第2 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.30, No.2 2012 年4 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. April 2012 抑制 HSP90 对缺氧肿瘤细胞辐射敏感性的影响 王慧宇 洪承皎 张保国 （苏州大学放射医学与防护学院 江苏省放射医学与防护重点实验室 苏州 215123 ） 摘要 为研究抑制HSP90 对缺氧模拟剂（CoCl ）处理的人宫颈癌Hela 细胞的辐射敏感性影响，分别用不同 2 浓度的CoCl2 处理Hela 细胞24 h 进行模拟缺氧处理，用不同浓度的HSP90 特异性抑制剂 17-DMAG 预处理细 胞 16 h ，应用γ射线照射细胞，照射剂量分别为2 、4 、6 和8 Gy ，采用克隆形成实验观察细胞的存活率，用 Western blot 实验检测HIF-1α蛋白表达量变化，用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。结果显示：用CoCl2 处理细胞可以诱导HIF-1α蛋白过表达；不同浓度17-DMAG 处理组的Hela 细胞在不同照射组间的存活率差异 具有显著性（p 0.01 ）；17-DMAG 预处理缺氧Hela 细胞后，HIF-1α蛋白表达随药物浓度增加受到显著抑制， 细胞早、晚期凋亡率随药物浓度增加而增加。结果表明：17-DMAG 预处理模拟缺氧细胞可增加细胞辐射敏感 性并促进细胞凋亡，其机制可能是通过抑制HIF-1α蛋白表达而发挥作用。 关键词 氯化钴，17-DMAG， HIF-1α，细胞凋亡，辐射敏感性 中图分类号 R811 ，R811.5 乏氧是多数实体肿瘤微环境的基本特征之一， 件下培养细胞，用热休克蛋白 90 的特异性抑制剂 乏氧肿瘤细胞的辐射敏感性很差，如何提高乏氧肿 17-DMAG 处理乏氧细胞，研究 17-DMAG 对乏氧 瘤的辐射敏感性一直是放射肿瘤治疗研究的重要 肿瘤细胞辐射敏感性的影响。 课题。乏氧肿瘤细胞的辐射敏感性与乏氧肿瘤细胞 [1] 1 实验材料和方法 对辐射损伤的响应有关 。HIF-1 （Hypoxia in- ducible factor1 ，HIF-1 ）是控制肿瘤细胞内多种乏 1.1 实验材料 氧相关生化事件的关键分子[2] ，直接影响乏氧肿瘤 1.1.1 细胞来源及细胞培养 人宫颈癌 HeLa 细胞 细胞的辐射敏感性，它由α和β两个亚基组成的异 购自中科院上海细胞所细胞库，用含10%小牛血清、 源二聚体，HIF-1β 呈组成性表达，HIF-1α 是氧调 100 U/mL 青霉素、100 μg / mL 链霉素的DMEM 培 节蛋白，它决定 HIF-1 的活性[3] 。热休克蛋白 90 养基，于 37℃、5%体积分数 CO2 、饱和湿度的培 （Heat shock protien 90 ，HSP90 ）是细胞内重要的 养箱中培养，每2 d 传代 1 次。 分子伴侣蛋白[4] ，它与效应蛋白结合，使这些蛋白 1.1.2 主要试剂及仪器 17-DMAG （Sigma 公司产 保持正确的构象，发挥它们正常的生物功能，而 品），用二甲亚砜（DMSO ）配成浓度为0.001 mol/L HIF-1 是HSP90 的效应蛋白[5] ，抑制HSP90 可以 的储备液，避光于-20℃保存备用。使用时用培养基 使HIF1-α 降解，从而阻断细