选修三 专题一 1.1 DNA重组技术的基本工具.ppt

§1－1 DNA重组技术的基本工具 gene engineering 2 基因拼接的理论基础 DNA是生物的主要遗传物质 DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸 双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构 3 外源基因在受体内表达的理论基础 基因是控制生物性状的独立遗传单位 遗传信息的传递都遵循中心法则阐述的信息流动方向 生物界共用一套遗传密码 4 基因工程 基因拼接技术、 DNA重组技术 按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出人类所需要的新的生物类型和生物产品。 是在DNA分子水平上进行设计和施工的。 定向地改变生物的遗传性状 5 DNA重组技术的基本工具 分子手术刀 限制性核酸内切酶（限制酶） 分子缝合针 DNA连接酶 分子运输车 基因进入受体细胞的载体 1、作用——限制性核酸内切酶能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并在使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 磷酸二酯键 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 ⒈分子手术刀——限制性核酸内切酶（限制酶） 9 切割DNA分子示意图 平(头)末端 SmaⅠ 中轴线两侧的DNA上的碱基是反向对称重复排列的 10 ⒉DNA连接酶——分子缝合针 将2条DNA片段连接成新的DNA分子，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 Ecoli DNA连接酶 来源：T4噬菌体 连接黏性末端和平末端（效率低） 来源：大肠杆菌 作用特点：只连接黏性末端 T4DNA连接酶 11 ⒉DNA连接酶——分子缝合针 Ecoli DNA连接酶 T4DNA连接酶 12 T4DNA连接酶 ⒉DNA连接酶——分子缝合针 13 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 两DNA片段之间的磷酸二酯键 将游离的脱氧核苷酸通过磷酸二酯键连接起来。 寻根问底： DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 14 作业： 选修三课本：P7习题 15 复习回顾： 1、基因工程的概念是什么？ 2、限制性核酸内切酶来自于哪里？ 3、限制酶的作用是什么？ 4、限制酶作用产生的结果是什么？ 5、DNA连接酶分为哪几类？作用分别是什么？ 6、DNA聚合酶与DNA连接酶有何区别？ 16 ⒊基因进入受体细胞的载体----分子运输车 作用 作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去； 利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（克隆） 类型 细菌细胞质的质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 17 质粒 裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（拟核）外，具有自主复制能力的双链环状DNA分子。 携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，停留在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 18 运载体必需满足的条件 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 有一至多个限制酶切点，而每种酶的切点最好只有一个，以便与目的基因连接； 有一定的标记基因，便于进行筛选 必须是安全的（对受体细胞无害，不选用霍乱弧菌的质粒） 天然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，需人工改造 限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测 19 提取目的基因 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测和鉴定 基因工程操作的基本程序 P6 模拟操作 EcoRⅠ酶切 OR SmaⅠ酶切 √ EcoRⅠ酶切 OR SmaⅠ酶切 √ DNA连接酶 22 作业： 《金榜》P63~P67 23 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序 列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切 割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 答案：C 24 2. （多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传 性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 答案：BD 25 3.下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 答案：D 26 27 EcoRⅠ限制酶切割DNA分子示意图 28 EcoRⅠ限制酶切割DNA分子示意图 29 酶Ⅰ C T A G G A T C 酶Ⅱ 30 P7-2 联系你已有的知识，想一想，为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 提示：迄今为