重组人EPON-联糖基化和O-联糖基化的全面表征.PDFVIP

[ 应用纪要 ] 重组人EPO N-联糖基化和O-联糖基化的全面表征 Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza和Erin E. Chambers 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 简介 ■ 1 解析EPO N-联糖基化和O-联糖基化信息 免疫球蛋白G (IgG)形态是许多蛋白质治疗药物的开发方向 。与此同 的两种简易策略 时，各种重组人体激素和酶的问世也让许多高效的患者疗法得以实 现。例如，促红细胞生成素(EPO)α等刺激红细胞生成的治疗药物很 ■ 实现高度天线化游离N-糖和完整蛋白 早以前就被用于治疗贫血症。这一增加患者红细胞数的疗法最早由 质糖型的前所未有的HILIC分离 ® 2 Epogen 公司商品化，该产品于1989年经FDA批准后在美国上市 。时 至今日，随着生物制药行业的格局不断发展以及Epogen专利过期 ■ 可兼容MS的HILIC能够详细研究样品成分 3 (2013年) ，EPO药品成为了国际和国内生物仿制药市场的仿制对象。 ® ■ 通过糖蛋白分离对ACQUITY UPLC 尽管促红细胞生成素α 的一级结构相对较小，但它含有3个N-糖基化 Glycoprotein BEH Amide糖蛋白分析专用柱 4 (300Å, 1.7 µm 固定相)进行QC测试， 位点和1个O-糖基化位点(图1) 。由于糖基化的原因，尽管促红细胞 确保批次间重现性保持一致 生成素α 的蛋白质质量仅为18 kDa，但其分子量却达到30 40 kDa 。 有趣的是，促红细胞生成素的糖基化与其功能和血清半衰期密切相 关。有研究表明，其糖基谱图中有两个属性与其体内活性(包括天 5-7 线化和唾液酸化作用)呈正相关关系 。因此，准确表征促红细胞生 成素治疗药物的糖基化非常重要。此外，研究促红细胞生成素的糖 基化还有另一项重要意义，那就是将详细的糖基分析作为开发有效 沃特世解决方案 的促红细胞生成素生物仿制药的重要途径。 ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide, 300Å糖蛋白分析专用柱(正在申请专利) 糖蛋白性能测试标准品 APPRLICDSR VLERYLLEAK EAENITTGCA EHCSLNENIT VPDTKVNFYA