稀土离子和肌质网（Ca^2＋＋Mg^2＋）—ATP酶相….pdfVIP

维普资讯 第 5卷 第 5期 自然科学进展一 国家重点实验室通讯 1995年 9月 稀土离子和肌质网 (Ca2++Mg2+)．ATP酶 相互作用的研究 中国科学院长春应用化学研究所稀 土忱学与物理开放实验室，长春 13~ 2) (中国科学院生物物理研究所生物大分子 国家重点实验室 北京 IC(~101) Q一7弓 摘要 研究 了稀土 离子对肌质 网 (Ca +M )-ATP酶活性的影响及其作用机 制．结果表 明，低浓度Gd对肌质网膜上 (CaH +MgH)．ATP酶有擞活作用，较 高浓度 Gd” 抑 制其 活性 ．Gd” 抑 制 纯化 酶 的活 性．低 浓度Gd”对磷脂 酸 (FA)、f。磷脂 (CL)重组酶有激活作用，而对磷脂酰胆碱 (Pc)、磷脂酰胆碱 (Pc)与 磷脂酰乙醇胺 (P日混合物 (PCP『日及 磷脂酰 丝氨酸 (is)重组酶无激活作用，低 浓度Tb” 对肌质网膜与纯化酶上 巳H 结合位点的影响不 同 需从分子及亚细胞水平 回答稀土对人体是有益还是有害及其作用机理 ．由于稀土三价离子与 钙离子半径相似 ，性质相似，因此它们的许多生物效应都反映在其对体 内钙的影响．肌质网 是肌原纤维周 围的膜系结构+它 的生理功能是调节细胞 内Ca 浓度 ，从而控制肌 肉收缩和 舒 张 ．关于稀土和肌质 网 (Q “+Mg )．ATP酶相互作用前人 已有所 报道+认为稀土抑 制 (c ”+Mg )-ATP酶活性和 cal2 结合到其转运位置上Il～ ，但是也有研究者报道稀土能 激 活 (Q “+Mg”)． rP酶 活性且不 是结 合在其 Q 转 运位置上 ～ ，稀 土如何影 响 (Ca +Mg“)-ATP酶活性及其作用机制仍是有争议的问题 ．我们从膜脂与膜蛋 白相互作用 方面研究了稀 土离子对肌质 网 (Q +Mg”)．ATP酶及重组酶活性 的影 响+证实 了低浓度稀 土离子对肌质阿 (Ca +Mg2)．ATP酶有激活作用 ，发现稀土离子对酶 活性 的影响与磷脂有 关，且稀土离子对肌质阿膜与纯化酶上的Ca 结合位点的影响不同，这对于 阐明稀 土的生 物效应具有重要的理论和实际意义 ． 1993-(15~04收稿、I9930·7_峥收修改稿 ·国家攀 登计划 。稀 土科 学基础研 究 资助项 目 维普资讯 自然科学进展—— 国家重点实验室通讯 第 5卷 1 材料和方 法 兔肌质N和 (ca +Mg )．ATP酶的分离和纯化参照文献 6【]从兔后腿及背部的白肌 中得 到 ．SDS．聚丙烯酰胺凝胶 电泳说 明肌质网膜和纯化酶主要含有分子量约 1．1×10 的蛋 白 质，即 (Ca +Mg )．ATP酶 ．依Lowry法I7】测定蛋 白含量，以牛血清 白蛋 白为标准 ．PA， PC，PE，CL及 PS系 Sigma公司产 品．其它试剂均为分析纯 ．Gd” 和 Tbj 溶 液的配制 和 标定 同文献 [8】． 按照文献 9【]测定 (ca +M )．ATP酶活性 ．将 Gd 溶液先和酶于 37t2保温 5min， 再启动反应 ．纯化酶在不同磷脂 中的重组用脱氧胆酸盐透析方法 ． 荧光滴定实验在 HITACHI．F．4010荧光分光光度计上进行 ．实验时，肌质网膜或纯化酶 蛋【白(40．g／mE)】加入含不同浓度 ca2 的5mmol／LTris-HC1(pH 7．0)缓冲液中， T 作为滴定剂进行荧光滴定 ，使滴定最后 总体积变化小于 5％ 激发波长 295Bin，发射波长 545nnl，狭缝 5nin。温度 30℃ ． 2 结果和讨论 2．1 G 对肌质网膜和纯化的(ca +M )-ATP酶活性的影响 Gd” 对肌质网膜和纯化的 (ca2 +M )．ATP酶活性 的影 响如 图 l所示 L【aH，TbJ ， Yb” 对酶活性的影响与Gd”类似，数据未列出)．Gd”对肌质网膜 (Ca”+Mg2)-ATP酶 活性 的影响