土壤微生物群落生物量和结构的分析.pdfVIP

240 陆地生态系统生物长期观测规范 10 土壤微生物群落生物量和结构的分析 10.1 土壤微生物生物量的测定 土壤微生物直接参与土壤中的物质转化，与土壤中的养分循环和植物生长状 况密切相关，其变化不仅是土壤生态系统状态的直接反映，也是土壤肥力的具体 表现。观测土壤微生物生物量碳、氮的变化，对于了解土壤养分转化过程和供应 状况以及生态系统演变特征具有重要意义。 由于土壤微生物的多样性和复杂性，还没有发现一种简单、快速、准确、适 应性广的方法。目前被广泛应用的方法包括：氯仿熏蒸培养法（FI ）、氯仿熏蒸浸 提法（FE ）、基质诱导呼吸法（SIR ）、精氨酸诱导氨化法和三磷酸腺苷（ATP ）法。 每种方法都有其优点、缺点、适用范围和条件，一般根据实验室的仪器设备和条 件，研究目的，选择测定土壤微生物生物量的方法（林启美等，1999）。 10.1.1 采样与样品预处理 采集具有代表性、典型性的新鲜土壤样品。采集到的新鲜土壤样品立即去 除植物残体、根系和可见的土壤动物（如蚯蚓）等，然后迅速过筛（2～3 mm ）， 或放在低温下（2～4 ℃）保存。如果土壤太湿无法过筛，进行晾干时，必须经 常翻动土壤，避免局部风干导致微生物死亡。过筛的土壤样品调节到田间持水 量的 40%左右，在室温下于密闭装置中预培养 1 周，密闭容器中要放入两个 50 ml 的烧杯，分别加入水和稀NaOH ，以保持其湿度和吸收释放的 CO2 。预培养后的 土壤最好立即分析，若需要放置一段时间，在低温下（2～4 ℃）最好不要超过 10 d。 第3 篇 室内操作规范与方法 241 10.1.2 氯仿薰蒸浸提法（FE ） 10.1.2.1 方法原理 土壤经氯仿薰蒸处理，微生物被杀死，细胞破裂后，细胞内容物释放到土壤 中，导致土壤中可提取的碳、氨基酸、氮、磷和硫等大幅度增加。通过测定浸提 液中全碳的含量可以计算土壤微生物量碳；测定全氮的含量来计算微生物生物量 氮；应用茚三酮反应可测定 α-氨基酸的数据，也可以估算微生物生物量。此外还 可以通过测定浸提液中磷和硫的增加量，从而估算土壤微生物生物量磷和微生物 生物量硫。本方法最大优点在于可应用于淹水土壤的微生物生物量的测定，并且 于碳、氮、磷、硫的同位素结合，研究土壤和环境的碳、氮、磷、硫的循环和转 化。 浸提液中碳可用重铬酸钾容量法测定，也可用微量碳分析仪测定。此处介绍 比较简单的重铬酸钾容量方法，浸提液中氮的测定采用蒸馏滴定的方法。 10.1.2.2 主要仪器 培养箱，真空干燥器，真空泵，往复式振荡机（速率 200 rev/min ），冰柜，消 煮炉，蒸馏定氮仪。 10.1.2.3 试剂 （1）无乙醇氯仿：量取 500 ml 氯仿于 1 000 ml 的分液漏斗中，加入 50 ml 硫酸溶液[ϕ(H SO ) = 5%]，充分摇匀，弃除下层硫酸溶液，如此进行 3 次。再加 2 4 入 50 ml 去离子水，同上摇匀，弃去上部的水分，如此进行 5 次。将下层的氯仿 转移到蒸馏瓶中，在 62℃的水浴中蒸馏，馏出液存放在棕色瓶中，并加入约20 g 无水 K CO ，在冰箱的冷藏室中保存备用。 2 3 （2 ）硫酸钾溶液[c(K SO ) = 0.5 mol/L] ：称取硫酸钾 （K SO ，化学纯）87.10 2 4 2 4 g ，加热溶于去离子水中，稀释至 1 L。 （3 ）重铬酸钾[ c (1/6K Cr O ) = 0.4000 mol/L] ：称取经 130℃烘干 2～3 h 的重 2 2 7 铬酸钾（K Cr O ，分析纯）19.622 g，溶于 1 000 ml 的去离子水中。 2 2 7 （4 ）邻啡罗啉指示剂：称取邻啡罗啉指示剂[C H N ·H O ，分析纯]1.49 g ， 12 8 2 2 溶