《环境生态学》实验指导书.docVIP

《环境生态学》实验指导书 陶玲 任珺 编 著 环境与市政工程学院 二零一零年九月 目 录 实验一 土壤重金属污染对植物出苗及生长的影响 2 实验二 土壤重金属污染对植物生理特性的影响 4 实验三 植物对土壤重金属富集作用研究 7 实验四 重金属污染对植物种子萌发及幼苗生长的影响 8 实验一 土壤重金属污染对植物出苗及生长的影响 实验目的 1. 了解重金属污染环境对植物种子萌发的影响； 2. 了解不同处理下植物生物量的变化； 3. 熟练掌握电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-AES）的操作。 实验材料 1. 仪器与设备 电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-AES）、电热鼓风干燥箱、电子天平、电炉、瓷坩埚、具塞试管、25mL容量瓶、漏斗、移液管、花盆（210×180）、定性滤纸、电子千分尺。 2. 试剂 配制不同浓度的Pb(NO3)2（分析纯）溶液；Pb(NO3)2的浓度梯度为0、100、200、500、1000、1500mg/L。 3. 材料 水萝卜（Raphanus sativus ）种子。 实验步骤 1．种子萌发实验 在花盆中放入一定体积的土壤，然后分别加入不同浓度梯度的重金属系列标准液，把精选的水萝卜种子，用70%酒精消毒2分钟后，蒸馏水冲洗数次，然后将其播种到花盆中，每盆50粒。实验共设5个处理浓度，其中对照处理一个，对照处理溶液为蒸馏水。每个处理设6次重复，花盆放在自然通风、光照充足的条件下。自种植日起记录植物出苗数，每隔24小时记录一次，并计算出出苗率。 2．植物生长实验 待种子萌发情况完全稳定后（第七天），用电子千分尺测量每株幼苗的根长、茎长、株高。 实验方法 1．萌发率、根长和茎长测定 每隔24小时记录一次出苗数。以第7天的数值计算出苗率。在每个花盆中选取生长适中的5-10 棵幼苗，用直尺测量芽长、根长。将测得的数据进行方差分析、回归分析。各项指标的计算方法如下： 1）出苗率：在规定的条件和时间内（一般为7天）长成的正常幼苗数占供试种子数的百分率，%。（即（种子出苗数/50）×100%） 2）根的耐性指数：（处理组中根的平均长度/对照组中根的平均长度）×100%。 （注：耐性指数大于0.5时，表明这种植物对此重金属有较强的耐受性，生长得较好。当耐性指数小于0.5时，则说明金属对这种植物的毒害作用明显，这种植物基本难以或不能生长在这种浓度的重金属环境中。） 3．数据处理方法 利用实验数据，计算出植物的出苗率和根的耐性指数，对各项指标进行方差分析和回归分析。 实验二 土壤重金属污染对植物生理特性的影响 一、实验目的 1．了解在不同的污染物浓度条件下植物形态症状的不同。 2．了解植物的样品的采集原则、采集方法及储藏方法。 3．掌握一般的植物生理指标的测量方法。 4．通过实验测定生理指标（脯氨酸、叶绿素a/b、可溶性糖），并统计数据、制作数据分析图表。 二、实验材料 水萝卜（Raphanus sativus）种子、花盆、Pb(NO3)2（分析纯）等。 三、实验步骤 1．脯氨酸含量的测定 （1）主要仪器设备：分光光度计、水浴锅、试管 （2）试剂：2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol/L磷酸以3:2混合 （3）脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置于试管中，向各管中加5ml 3%的磺基水杨酸溶液，在沸水浴提取10分钟（提取过程中要经常振动），冷却后过滤。 吸取2ml提取液于另一干净的试管中，加2ml冰醋酸及2ml酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热40分钟，溶液即呈红色。冷却，向各管加入5ml甲苯，充分振荡，以萃取红色物质，静止待分层后吸收甲苯层以0号管为对照在520nm下比色，得吸光度值。 （3）计算结果： 脯氨酸（）= 2．植物叶绿素含量的测定 仪器：分光光度计、电子顶载天平(感量0.01g)、研钵、棕色容量瓶、漏斗、定性滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管、移液管。 试剂：95％乙醇（或80％丙酮）、石英砂、碳酸钙粉 测定：叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。 取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。称取剪碎的新鲜样品2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白。静置3～5分钟。 取滤纸1张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。