猪瘟耐热冻干保护剂活疫苗PPT.ppt

（2）水替代假说 在蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过氢键与蛋白质分子联接。当蛋白质在冷冻干燥过程中失去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质表面上水的羟基，使蛋白质表面形成一层“水合层”，这样就可以保护氢键的联结位置不直接暴露在周围环境中，从而保持了蛋白质天然结构和功能的完整性 “水替代”假说，当冷冻干燥时，保护剂可与生物大分子的失水部位形成氢键，替代保持生物大分子空间结构和生物活性所必须的水分子，从而减轻了生物大分子冻干损伤 ? 保护剂对细菌细胞膜的保护 水分子可通过氢键与细胞膜中磷脂的极性端相连，而且每个磷脂的极性端与其他磷脂分子的极性端被水分子隔开。冻干保护剂特别是糖类保护剂分子上的羟基具有与膜磷脂上的磷酸集团连接形成氢键的能力，从而阻止和限制细胞膜因脱水而融合，降低相变温度，使脂膜不易向凝胶相转变而保持液晶相，增加膜的流动性? 保护剂对蛋白质的保护 由于蛋白质分子中存在大量的氢键，结合水通过氢键与蛋白质分子联结。当蛋白质在冷冻干燥过程中失去水分后，保护剂的羟基能够替代蛋白质表面上水的羟基，使蛋白质表面形成一层“水合层”，这样就可以保护氢键的连结位置不直接暴露在周围环境中，从而保持了蛋白质天然结构和功能的完整性 3 储藏过程中的保护机理 干燥过程中出现的引起蛋白质变质的时间尺度为小时，而对于储藏而言，时间尺度为月或年。在正确冷冻干燥工艺中，要求产品温度接近于其玻璃化转变温度，而在正确的储藏条件下，环境温度应当比其玻璃化转变温度低得多，以获得很长的松弛时间 保护剂指导原则 蛋白质、二糖、氨基酸和缓冲盐水 疫苗块的倒塌温度由赋形剂组成的相对浓度决定 保护剂应在抗原收获或冻干前加入抗原中 它应含有中和羧基活性的物质 电解质成分应含量最少 影响保护剂的因素 种类、浓度、配制方法 灭菌方法 pH值 制品表面积 四. 耐热保护剂在配制过程中注意事项 1. 保护剂在配制过程中注意事项 水的标准 称量的准确度和误差 溶解顺序 大分子物质与小分子物质混合 保护剂贮存温度 ① 配制过程中水的要求 配制用水为注射用水或去离子水，水的电导率＜ 1μs/cm（相当于100万Ω）。 ② 保护剂的称量 在配制过程中，用量筒准确量取所需注射用水量， 准确称取各保护剂成分逐次加入，一种成分完全 溶解后再加入另一种成分，直至完全加完。（操作 必须由2个人来完成，1人称量、1人复核）。 ③ 按照保护剂配方中的先后顺序依次加入溶解。 ④ 大分子物质与小分子物质混合时，边摇边加，使二者充分混匀，混合后观察有无沉淀，如有沉淀应停止使用。 ⑤ 耐热保护剂均应按保护剂质量标准要求进行保存，不合理的保存也会影响保护剂的耐热性能。 2. 耐热保护剂的灭菌 大分子部分（高压部分） 高压温度高，时间过长 高压瓶子的大小也会影响保护剂的性能，同是一批 保护剂，使用1000ml装量瓶与8000ml装量瓶高压后 保护剂的性能有明显差异，装液体多的瓶子上温时 间较慢，这样在达到某一温度就需要很长时间，导 致保护剂中各成分分解变性 高压后闷锅现象 保护剂在高压后不及时打开高压锅门，致使保 护剂在同一温度停留的时间比较长，影响保护 剂中各成分性能，导致保护剂在冻干过程中起 不到保护作用 解决方法： 按耐热保护剂灭菌的要求时间、温度进行操作 （121℃15分钟）,建议使用适当的容器，装量不 宜过大（达到上温快、降温快）。高压后，仪表 降至零，应立即打开高压锅门，不要把保护剂闷 在锅里等冷却后取出，更不要在高压锅里过夜 小分子部分（过滤部分） 不匹配的滤芯也会影响保护剂的质量。不合理滤芯 对耐热保护剂中各物质分子吸附过多，致使保护剂 各成分的最终含量低于保护剂配方的要求含量。影 响耐热保护剂活疫苗的产品质量 解决方法： 要求吸附性小的滤芯，最好是进口的。进口滤芯 （Millipore）即可以增加使用次数，除菌效果 又好。国产滤芯吸附性大，而且使用次数少，又 不稳定，影响保护剂的质量 3. 耐热保护剂保存与使用 按耐热保护剂质量标准要求保存。大分子部 分与小分子部分按比例混合后置2～8℃保存，一 般不要超过10日 每一种保护剂在使用过程中禁止单一加入 (如：将小分子加入抗原后，再加入大分子物质)， 应将小分子物质与大分子物质按比例混合均匀后 与抗原混合，进行分装 五. 冻干工艺的优化 冻干过程 1 预 冻 2 一次干燥（冰升华） 3 二次干燥（解吸附作用） 1.预冻 预冻速度：控制在每分钟下降1℃左右 产品降至－40℃或冻干机所能降的温度，确保箱内所有疫苗瓶内都降到共熔点以下 2.一次干燥 一般以每小时2～5℃为宜 板层温度应控制在-10℃至3℃之间 兽用活疫苗在-30℃或以下温度进行 真空应维持在100－120to