第12专题分子生物学技术在昆虫分类学中运用PPT.ppt

江西农业大学农学院植保系 王建国 2013-11-03; 唐觉教授对日本臭蚁的鉴定;新技术在分类学上的运用 几乎每一次生物技术方法的进步都会被引入到昆虫的分类中来. 1电子显微镜和扫描电镜带来了超微形态学 形态上可解决一些近似种的分类 2血清学反应方法,同功酶分析 3 层析法电泳法 4 蛋白质和氨基酸分析方法, 5核酸的研究 RAPD,RFLP,分子系统发育分析 6数值分类法 新的统计分析软件使分类进入数理统计水平 传统形态分类技术和新技术的发展使分类工作进入一个高速发展的时代. 传统形态分类与现代分类技术的关系。;红火蚁标本实体,粘在三角纸上的干标本;新技术在分类学上的运用(二);DNA模型;常用的昆虫分类技术;一、形态学分类法;但是传统的形态学方法有不少的局限，例如一些昆虫的形态特征不稳定、同种异型和异种同型现象、近缘种，形态结构十分相似等问题。 ;扫描电子显微镜;五、分子生物学方法;PCR技术 聚合酶链式反应技术 ;PCR技术常与RAPD技术结合应用，如Kambhampati等(1992),应用RAPD-PCR技术对蚊虫和蚜虫进行了分子系统学的研究。Paskewitz(1993)用PCR技术识别按蚊种类。此外，RFLP、RARDPCR、DNAfp等方法也应用在同翅目蚜科、蝉科和叶蝉科等昆虫的研究方面。直翅目蝗科、鞘翅目叶甲科、鳞翅目凤蝶科等方面也有类似研究。;1. RAPD标记技术;目前，RAPD已成为昆虫遗传图谱构建中的一种普遍方法。我国近年来已在果蝇、蚊虫、玉米螟、棉铃虫等昆虫研究中应用RAPD技术在DNA分子水平上进行了研究，取得了一些成绩。 RAPD技术一出现，就被用于蚊虫的分子系统学研究。孙珊、徐茂磊等应用RAPD方法对我国黑龙江、北京、陕西、浙江 云南和新疆等6个地区的玉米螟种群进行了分析，并通过聚类分析为我国不同地区玉米螟的现代系统学研究提供了新的分类依据。吴厚永、赵彤言利用RAPD技术从DNA分子水平探讨了尖音库蚊复合组4个亚种的分化，结果表明，尖音库蚊是原始的类群，而致倦库蚊和淡色库蚊是最为进化的类群。; RAPD标记技术 论文1 论文2;2. SCAR技术;3. RFLP技术;当一个基因组比较小时，就可以将提纯的DNA用限制内切酶消化成各种不同长度的DNA片段，进行琼脂糖凝胶电泳分离并用溴化乙锭染色后，可以在紫外灯下直接观察多态性，但对于大分子DNA来说各种片段在电泳胶上连成一片，相互重叠，根本无法进行分辨，因此不能直接观察限制性片段长度的多态性。要检测大分子DNA的RFLP，就要借助分子杂交技术，用某一标记的DNA片段作为探针，与电泳后的DNA片段进行杂交，这样，与探针片段有高度同源性的DNA片段就可以被检测出来。;目前典型的RFLP研究都选择mtDNA进行。龙漫远(1993)报道了选择mtDNA进行RFLP研究获得DNA限制性内切酶图谱以及片段长度多态性等的分析方法 。赵惠燕等在同翅目昆虫的分类方面也应用了同样的分析方法。对于昆虫来说，目前大多数mtDNA的限制性片段长度多态性研究都是在种内或近缘种间进行，而科、属等高级阶元问的分析较少。Chapco(1994)用同样的方法研究了l1种蝗虫之间的演化关系。乔传令等(1996)对库蚊(Culex pipiens )的限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)进行了研究，结果表明不同地理种群都有相同的单基因扩增，但在扩增水平上有较大差异。 应用RFLP分析方法，使传统的昆虫分类区系及系统进化研究获得了新的发展和飞跃，解决了一些用传统分类方法无法解决的难题 ;4. AFLP技术;5. SSCP技术;6. DSCP技术; Sequence and Sequencing 包括DNA的序列分析和RNA的序列分析。;在种内或近缘种的系统发育关系确定方面，通常用进化较快的mtDNA核苷酸片段，对于科、属等高级阶元的系统发育研究中，通常用进化较慢的rDNA和rRNA核苷酸片段。 现在许多昆虫特别是双翅目的果蝇、膜翅目的蜜蜂、直翅目的飞蝗等的mtDNA的序列已经很清楚了，由于rRNA在昆虫中分布广泛，易于分离，且rRNA属于慢速进化的基因，因此对不同昆虫rRNA的序列分析可以广泛地应用到科、属等高级阶元的系统发育研究。;近年来，核酸序列分析方法与PCR及RFLP技术相结合，在昆虫系统发育研究方面取得了一定成就。 Chapco(1994)应用按酸序列分析方法对直翅目l1种蝗虫的进化关系进行了研究。 曹功杰(1988)对7种昆虫的5SrRNA结构特点进行了比较研究。 ;通过测定DNA，RNA的核苷酸顺序，对昆虫进行分类并构建其系统发育关系，有望在重要的农、林、医学昆虫