第5章微生物的遗传变异与菌种选育1PPT.ppt

 设备：紫外灯、磁力搅拌器、暗室等， 紫外灯：波长为253、7nm, 功率是15W 处理时的照射距离：20cm — 30cm 样品：要直接暴露在紫外灯下，厚度不能超过3mm 照射时，要用磁力搅拌器搅拌。 处理剂量：常用照射时间或死亡率作为相对剂量。 紫外诱变方法: 由于微生物接受的照射剂量与灯的功率、照射距离、照射时间、菌液浓度、菌液厚度、细胞本身特性等因素有关，所以单纯用时间表示照射剂量并不完全可靠。一定的死亡率必定对应一定的照射剂量，所以，在实际应用中，用死亡率表示照射剂量更可靠。 通常先绘制照射时间与死亡率的关系曲线，然后选择合适的剂量。 生产上经常采用的剂量：死亡率为70%——80%左右。 重组修复： 必须在DNA复制的情况下进行，所以又叫复制后修复。 细胞在不切除二聚体的情况下，以带有二聚体的这条链为模板合成互补单链，但在每个二聚体附近留有一空隙。通过染色体交换，空隙部位就不在面对着胸腺嘧啶二聚体，而是面对着正常的单链，在这种条件下，DNA聚合酶和连接酶起作用将空隙部位进行修复， 重组修复中的DNA损伤并没有去除，但随着微生物的传代繁殖，损伤的比例逐渐降低。 “SOS”修复 “SOS”为国际通用的呼救信号，为“save our soul”的缩写。“SOS”修复是指细胞处于危急状态，即DNA分子受到大范围损伤，而复制又受到抵制的情况，受到损伤的DNA发出信号，诱导“SOS”修复酶对DNA损伤进行修复。 5.3 微生物的基因重组 基因重组又称为遗传重组，它是指把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子的重新组合后，形成新遗传型个体的过程。 重组是分子水平上的概念，可以理解成是遗传物质分子水平上的杂交，而一般所说的杂交是细胞水平上的概念。 杂交中必然包含着重组，而重组则不限于杂交一种形式。真核微生物中的有性杂交，准性生殖以及原核微生物中的转化、转导、接合和溶原转变等都是基因重组在细胞水平上的反映。 5.3.1原核微生物的基因重组5.3.1.1转化（transtormation） 转化过程： ① 从供体菌提取出转化因子双链DNA片段； ② 双链DNA 片段与感受态受体菌的细胞表面特定位点结合； ③ 在结合位点上，双链DNA 中的一条单链逐步降解，同时另一条链逐步进入受体细胞。 ④ 进入受体细胞的DNA 单链与受体菌染色体组上同源区段配对，而受体菌染色体组的相应单链片段被切除，并被进入受体细胞的DNA 单链所取代，于是形成了杂种DNA 区段； ⑤ 受体菌染色体进行复制，其中杂种区段被分离成两个，一个恢复，一个形成一个转化子。 受体菌直接吸收来自供体菌的DNA 片段，通过交换组合把它整合到自己的基因组中，从而获得了供体菌的部分遗传性状的现象，称为转化。转化后的受体菌，称为转化子。供体菌的DNA 片段称为转化因子。 只有处于感受态的细菌才能接受转化因子，进行转化作用。 5.3.1.1转化 5.3.1.2转导 (transduction) 转导是以噬菌体为媒介，把一个菌株的遗传物质导入另一个菌株，并使这个菌株获得另一个菌株遗传性状。转导又分为普遍性转导和特异性转导。 普遍性转导(generalized?transduction)是指转导型噬菌体能传递供体菌株任何基因。如大肠杆菌P1噬菌体、伤寒沙门氏菌的P22噬菌体等都能进行普遍性转导。它的转导频率为10-5～10-8。能进行普遍转导的噬菌体，含有一个使供体菌株染色体断裂的酶。 5.3.1.2转导（transduction ） 当噬菌体DNA被噬菌体蛋白外壳包裹时，正常情况下，是将噬菌体本身的DNA包裹进蛋白衣壳内，但也有异常情况出现，供体染色体DNA?(通常和噬菌体DNA长度相似)偶然错误地被包进噬菌体外壳，而噬菌体本身的DNA却没有完全包进去，装有供体染色体片段的噬菌体称为转导颗粒。转导颗粒可以感染受体菌株，并把供体DNA注入受体细胞内，与受体细胞的DNA进行基因重组，形成部分二倍体。通过重组，供体基因整合到受体细胞的染色体上，从而使受体细胞获得供体菌的遗传性状，产生变异，形成稳定的转导子。 5.3.1.2转导（transduction ） 特异性转导(specialized transduction)是指温和噬菌体侵染而形成的某一溶源细菌群被诱导裂解时，其中极少数个体的DNA可能与噬菌体的DNA发生若干特定基因转换，从而被整合到噬菌体的基因组上，当该噬菌体周到次感染受体细胞时，就使受体细胞获得了这一特定遗传现象。它的转导频率为10-6。特异性转导是在大肠杆菌K12的温和型噬菌体中被首次发现的。 5.3.1.3接合（conjugation ） 通过供体细菌和受体细菌完整细胞