第5章脱毒苗的培育PPT.ppt

植物组织培养;一.病毒在植物体内的分布及危害； 二.植物脱毒的意义 三.植物脱毒的原理和方法； 四.植物脱毒苗的鉴定； 五.植物脱毒苗保存、应用与繁殖;目的与要求：;;无病毒苗;黄瓜病毒病;;; 危害一些植物的病毒数目;病毒的特性及侵染; 所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。 无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。 ;二、植物脱毒的意义;2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用 ◆离体繁殖周期短 ◆不受季节限制 ◆繁殖系数高 ◆繁殖速度是任何其他方法所不能比的，又称 之为快繁;3、生产无病毒种苗，防止品种退化;4、节约耕地，提高农产品的商品率;5、便于运输;以马铃薯为例： 按一亩地4000株计算，常规薯4000个重200kg（每个50g），若用试管薯4000个则只有2kg（每个0.5g）。;;;三、植物脱毒的原理和方法;;（二）植物脱病毒方法;1.热处理脱毒法 热处理脱毒原理 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 ;热处理方法 （1）愈伤组织热处理 离体培养 愈伤组织 热处理继代 分化培养。 常用温度及时间：低温37—38℃处理2周、4周或8周；高温50℃处理3—5min。;（2）热空气处理脱毒法 试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。 生长室温度35-40℃ 光照3000—10000 lx;热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 ;;马铃薯在37℃下处理10～20天能除去卷叶病毒。;2.组织培养脱毒法 包括微茎尖培养脱毒、愈伤组织培养脱毒、珠心组织培养脱毒。 （1）微茎尖培养脱毒法 脱毒效果好 后代遗传稳定 使用最广泛的一种方法 ;1）原理及依据 病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争 2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。;茎尖培养; 2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上 解剖镜下剥去幼叶 切下带1～2个叶原基的生长点（0.3～0.5mm） 切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。;优缺点：;;;;热处理结合茎尖脱毒培养; 用于脱毒的适宜茎尖大小;脱毒时，最好找出茎原基所带叶原基的数目与生长点（茎尖）大小的相关性，这样在取材时就方便多了 茎尖越小对培养基的要求越高，剥离技术要求越高，成功率越低。 ;2、愈伤组织培养脱毒法 （1）原理及依据 a、病毒在植物体内分布不均匀 b、病毒复制的能力衰退或丢失 c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异;（2）技术关键 诱导再生植株的愈伤组织 （3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，常出现一些变异。;（3）珠心组织培养脱毒法 病毒是通过维管组织传播，而珠心组织和维管束系统无直接联系，故可以通过珠心组织离体培养获得无病毒植株。 目前已用该方法去除了柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、速衰病等病毒。;;3.微体嫁接离体培养脱毒法 应用微体嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 具体做法： 将极小的茎尖