高效液相色谱法123PPT.pptVIP

第12章 高效液相色谱法;HPLC与经典LC区别;第2节 基本理论-速率理论;组分在色谱柱中运行时间不同，导致色谱峰展宽。 影响因素：固定相的粒度和填充均匀程度;减少方法 ： a 降低dp：目前商品柱多采用3-5μm粒径 b 降低λ：采用球形、均匀分布固定相。;减免方法：1）减少固定相颗粒直径 2）减少流动相液体黏度（甲醇）;4. 静态流动相传质阻力项Csmu;5. 固定相的传质阻力项Csu;6、HPLC法中分离条件的选择;2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇，1ml/min 3. 柱温的选择： 选室温25-300C左右。太低，流动相黏度增加，太高容易产生气泡;二、柱 外 展 宽;第3节 各类高效液相色谱法;一、吸 附 色 谱 法;二、 化学键合相色谱法;?正相键合相色谱法： 极性键合相，如氨基柱、氰基柱 适用：极性化合物;1）分离原理 流动相与溶质有排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合，且缔合反应是可逆的。 k↓，组分tR↓;2）固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱） 十八烷基键合相：常用的非极性键合相 ;低碳型： R1、R2都是氯;表面覆盖度：参加反应的硅醇基数目，占硅胶表面硅醇基总数的比例。;3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 固定相极性 底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈，四氢呋喃 ;4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5）出柱顺序：极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6）适用：非极性-中等极性组分;用ODS柱分离苯、甲苯，流动相为甲醇-水（95：5） 问：①哪个先出柱 ②若要增大tR，应增大甲醇还是水的比例?;1）分离机制： 2）固定相：极性大的氰基或氨基键合相 3）流动相：极性小 底剂 + 有机极性调节剂 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇;4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 5）出柱顺序：极性小的组分先出柱 极性大的组分后出柱;6）适用： 氰基键合相：与硅胶的柱选择性相似 氨基键合相：糖类等;3．离子对色谱法（IPC或PIC）;3．洗脱方式 ;;;流动相的性质和选择;2)流动相的物理性质;常用于HPLC流动相溶剂的性质;正丁醇;①溶剂的强度因素ε,P/ 规定：戊烷在Al2O3的ε=0;;;ε0：液-固色谱中溶剂强度参数，反 映溶剂分子对吸附剂亲和力。 经验：ε0减小0.05，k值增加1~3倍;③极性参数P/ ;极性参数P与溶剂强度参数关系[投影];④粘度参数;2、溶剂的选择性与分类(Snyder);参考物的选择 ;表2 Snyder的溶剂选择性分组 ;举例：在反相色谱中，计算甲醇-水 (60:40)的溶剂溶剂强度，如果改用 相同强度的乙腈-水溶剂，四氢呋喃 和水其比例是多少？;THF-水 S=X×4.5+(1-Y)×0=1.56 Y=0.35 ;3溶剂优化的步骤：;如:四面体-三角形法 1选择乙腈-水, 2.比例100%往下调节确定k值而得最适合的比例.图9-29;4、色谱分离条件的优化指标;[举例]取代萘混合物分离的优化试验;2、作下列流动相的色谱图,求β=0, Ai=1,Rd为1.2;1.8;2.4时COF值;表 Zorbax C8柱上取代萘的COF值