猪瘟传染病实验布鲁氏菌病的实验室诊断.pptx

布鲁氏菌病的实验室诊断实验目的 初步掌握布氏杆菌病的细菌学、血清学诊断及变态反应等检疫方法。一、细菌学检查染色观察 改良Ziehl-Neelsen氏法：适于做胎膜和流产胎儿内容物，流产后阴道拭子。布氏杆菌染成红色，背景为蓝色。 改良Koster氏法：布氏杆菌染成桔红色，背景为蓝色。培养：培养基：普通培养基、肝汤培养基，血清葡萄糖琼脂或吐温葡萄糖琼脂选择培养基：20-70万分之一的结晶紫或80万分之一的乙基紫条件：两份，一份于10%CO2动物实验 豚鼠接种方法：皮下或腹腔注射，表现脾脏肿大，肝脏和肾脏有炎性坏死小病灶，3-4周已能在脾脏和淋巴结中找到细菌。 接种2只，一只3周剖杀，一只6周剖杀，剖杀前做凝集反应，1:5以上为阳性二、血清学诊断试管凝集反应： 抗原：用0.5%石碳酸生理盐水1:10稀释 血清：新鲜，无明显蛋白凝固，无溶血和腐败 稀释血清：牛：1:50、1:100、1:200、1:400 羊：1:25、1:50、1:100、1:200弃去10滴稀释血清23滴稀释液2滴血清10滴稀释血清10滴稀释液 310滴稀释血清10滴稀释液 410滴稀释血清110滴稀释血清10滴稀释液 210滴稀释后的抗原比浊管的配制管号稀释好的抗原（ml）稀释液（ml）清亮度（%）标记101.0（20滴）100++++20.25（5滴）0.75（15滴）75+++30.5（10滴）0.5（10滴）50++40.75（15滴）0.25（5滴）25+51.0（20滴）00-全部试管充分震荡，37-38度温箱中，22-24h后用比浊管对照检查记录结果。出现50%以上凝集的最高稀释度就是这份血清的凝集价，因此50%亮度的比浊管很重要。结果判定：阳性可疑阴性牛、马和骆驼1:100以上1:50低于1:50猪、羊和够1:50以上1:25低于1：25可疑家畜3-4周重检，牛羊重检仍为可疑，判为阳性；猪和马重检仍为可疑，同场未出现阳性，判为阴性。猪弱阳性时，应结合流行病学判定结果平板凝集反应：++++：出现大凝集片或小粒状物，液体完全透明，即100% 凝集；+++：有明显凝集片和颗粒，液体几乎透明，即75%凝集；++：有可见凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集；+：仅仅可见颗粒，液体浑浊，即25%凝集；-：液体均匀浑浊，无凝集现象。0.08、0.04、0.02、0.021:25、1:50、1:100、1:200虎红平板凝集试验 被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各1滴，滴于玻璃板上，混合均匀，室温4-10min记录反应结果。 同时设定阴阳性血清对照。 在对照成立的情况下，被检血清出现任何程度的凝集现象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。全乳环状反应（ABR） 取新鲜全乳1ml加入小试管中，加入抗原1滴充分震荡混合，置37-38℃水浴中60min，小心取出试管，立即进行判定。 按乳脂和乳柱的颜色判定。强阳性反应（+++）：乳柱上层的乳脂形成明显红色或蓝色的环带，乳柱呈白色，分界清楚；阳性反应（++）乳脂层的环带虽呈红色或蓝色但不如+++显著，乳柱微带红色或蓝色；弱阳性反应（+）乳脂层环带颜色较浅，但比乳柱颜色略深；疑似反应（±）乳脂层环带不甚明显，并与乳柱分界模糊，乳柱带有红色或蓝色；阴性反应（-）乳柱上层无任何变化，乳柱呈均匀浑浊的红色或蓝色。变态反应试验 布氏杆菌水解素，0.2ml皮内注射绵羊或山羊的尾褶壁部或肘关节无毛处，24和48h各观察反应一次，若两次反应不一致，应以反应最强的一次作为判定依据。强阳性反应（+++）注射部位有明显不同程度肿胀和发红，不用触诊，一望而知；阳性反应（++）肿胀程度虽不如上述现象明显，但也容易看出；弱阳性反应（+）肿胀程度也不显著，有时须靠触诊才能发现；疑似反应（±）肿胀程度似不明显，通常须与另一侧皱褶相比较阴性反应（-）注射部位无任何变化。