植物载体表达构建PPT.pptVIP

植物基因工程常用的报告基因 指其编码产物能够被快速地测定、常用来判断外源基因是否已经成功地导入寄主细胞（器官或组织）并检测其表达活性的一类特殊用途的基因。 作为报告基因的条件 在转化的寄主细胞中应不存在相应的内源等位基因的活性， 其表达产物不仅不会损害寄主细胞，而且还应具有快速、灵敏、定量和可重复的检测特性。 报告基因 1、绿色荧光蛋白基因 （GFP green fluorescence protein ） 2、B-葡萄糖苷酸酶基因（GUS基因b-D-glucuronidase ） 3、荧光素酶基因（LUC fire fly luciferase ） 4、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因） 5、抗生素基因 Jellyfish Aequorea victoria: one of the oldest species on the earth Green Fluorescent Protein (GFP) ???????????????????????????????????????????????????????????????????????? This is a stereo view of GFP generated from the Brookhaven Database using R If you have the Chyou may follow the links to see GFP in action! Last updated (c) 1997 RWZELLER GUS酶的底物是无色的X-葡萄糖苷酸（X-glucuronide, X-gluc) GUS酶的显色反应以底物不同而不同： 5-bromo-4-chloro-3-indole-B-D-glucuronide 靛蓝 5-bromo-6-chloro-3-indole-B-D-glucuronide 橘红 4-methylumbelliferyl-B-D-glucuronide 荧光产物 B-glucuronidase(GUS) 检测方法 用于GUS基因检测的常用底物有三种： X-Gluc 5-溴-4-氯-3-I吲哚-B-D-葡萄糖苷酸酯 X-MUG 4-甲基伞形酮酰-B-D-葡萄糖苷酸酯 PNPG 对硝基苯B-D-葡萄糖醛酸苷 组织化学染色定位法 荧光法测定GUS活性 分光光度法测定GUS活性 组织化学染色定位法 该方法是将底物进入被测的植物组织。 将被检材料浸泡在含有底物的缓冲叶中保温，在适宜条件下该酶可将X-Gluc水解生成蓝色物质。 初始产物并不带有颜色，为无色的吲哚衍生物，后经氧化二聚作用形成5，5‘-二溴-4，4’-二氯靛蓝染料，使具有Gus活性的部位或位点呈现蓝色。 注意：在测定时，由于植物体内的过氧化物酶能促进氧化二聚作用，使颜色加深，所以染色程度不能准确反映Gus活性， Figure 1 a) Mature cold stored potato tubers, transformed and control, stained for GUS activity. b) In vitro-grown microtubers, transformed and control, stained for GUS activity Transgenic Arabidopsis stained for GUS activity showing promoter activity of the constitutive promoter CaMV35S and B) the PsMTA promoter from pea ? Pattern of atao1 activity visualised by GUS expression following infection with either H. schachtii or M. incognita. Left The atao1 promoter drives GUS expression at the boundary of the symcytium of H. schachtii (n). Right In a gall induced by M. incognita (n) the disrupted vasculature shows strong expression of GUS driven by atao1 (gc, giant cells). Left, Down regulation of CaMV35S promoter in the syncytium of Heterodera sch