不同产地和生长季节喜树叶中喜树碱含量测定.pdf

维普资讯 维普资讯 5期 张玉红等 ：不同产地和生长季节喜树叶中喜树碱含量测定 573 1 实验材料 l-1 材料 喜树幼嫩叶和成熟叶。 幼嫩叶：在枝条最上端生长旺盛的部分，一般是顶芽以下 3～5片叶，叶片呈暗红色 (幼嫩程度不同，颜色也有所不同，越嫩暗红色越明显)。 成熟叶：在喜树枝条中下部的叶子，叶片深绿。 1998年7月中旬在河南信阳和新县、贵州兴义、安龙和兴仁、广西桂林和南宁、四川 都江堰、南充和金堂、湖南岳阳和怀化及云南的大理和景洪等地从 10～20年生的喜树上 采摘幼嫩叶和成熟叶。 不同生长季节的喜树嫩叶在 1998年4一l1月采 自四川省都江堰，每月中旬采摘。 所有样品采集后 80~C烘干至恒重，粉碎至 60目，干燥器中保存备用 。 喜树碱标准品由美国StehlinFoundationCancerResearch的ZhisongCao惠赠o 2 研究方法 2．1 喜树碱的提取 喜树碱的提取采用超声平衡提取法 (阎秀峰等，2002)：称取样品4g置于 100mL容量 瓶中，加入90mL61％乙醇，在50~C的温度下超声提取 10rain，冷却定容，取样离心，进行 分析。 2．2 喜树碱含量的高效液相色谱 (I肌 C)分析 2．2．1 色谱条件 色谱 WatersODS柱 (25cm×4．6mill，5 )；流动相 ：乙腈 ／．(v／v，3／ 7)；流速：1mL／min；检测波长．254rim；进样量 10rE；柱温 ：25~C。该色谱条件下喜树碱标 准品和样品的色谱图(图 1)。 ， 邑 A 口 8 ＼- Time in) Tim 6tin) 图1 喜树碱标准品(A)及喜树嫩叶样品提取物 (B)色谱图 rag．1 0l砌瑚t0差 lTlsofstandardca】唧 iIl((=E，I)(A)andextractfromleavesof 唧 ∞Ⅱc瑚函l咖 (B) 2．2．2 标准曲线的绘制 精密称取喜树碱标准品3．45zllg，置于 100mL的容量瓶中，加 入95％分析纯乙醇，超声波助溶并定容至刻度，摇匀，备用。 分别精密吸取喜树碱标准溶液 1mL、2mL、3mL、……10mL置于 10mL的容量瓶中， 用 95％的乙醇溶液分别稀释定容至刻度，摇匀。按照上述色谱条件 ，分别取稀释后的标 准溶液样品进样分析，每个标准溶液样品重复测定3次，分别取峰面积的平均值。得峰面 lⅢ 圈棚 _ 维普资讯 维普资讯 5期 张玉红等 ：不同产地和生长季节喜树叶中喜树碱含量测定 3．2 不同月份的喜树嫩叶中喜树碱 含量 1 1 1 1 l 0 0 0 8 若6 4 2 0 8 6 4 喜树每年 3月开始萌发新叶，一 直到当年的11月仍有新叶萌出。研究 表明，在一年生长过程中，喜树嫩叶中 喜树碱含量为一单峰曲线，从当年的4 月到 7月，喜树嫩叶中喜树碱的含量 2 4 6 8 10 12一直