稳定表达人Siat7e基因的MDCK细胞系的建立和全悬浮细胞的驯化精选.pdfVIP

中国生物工程杂志 稳定表达人 基因的 细胞系的 建立和全悬浮细胞的驯化 张 妍 张文俊 李群辉 刘晓文 刘文博 刘秀梵 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 摘要 目的现有的禽流感疫苗生产的方法已经不能适应工业化大生产的需求有必要开发全悬 浮培养的细胞系来满足大生产的需求 方法 我们通过转染稳定表达 基因的真核表达载体 对 细胞进行改造 并经过后期的驯化 筛选适应于全悬浮培养的 细胞 结果 成功 筛选到能稳定表达 基因并能适应全悬浮生长的细胞系 结论 该细胞系具有潜在的应用价 值为细胞的培养以及工业化大生产疫苗提供参考 关键词全悬浮疫苗生产 中图分类号 传统的流感疫苗生产都是采用鸡胚生产的方法 唾液酸从供体上传输到神经节苷支上的 此种方法受到很多因素的限制如可靠鸡胚的来源较 乙酰半乳糖苷上 长的培养周期繁琐的操作步骤以及很容易受污染 本文以细胞为研究对象对基因进 行改造并进行了单细胞全悬浮培养的驯化获得了适 等 由于其具有培养容易增殖快流感病 毒感染效率高等特点被作为流感病毒疫苗生产的重 应全悬浮培养的细胞系为细胞的悬浮 要细胞系之一 常规细胞的培养采用二维单细 培养以及工业化生产疫苗奠定了基础也为其他细胞 适应于疫苗生产的培养驯化提供了借鉴 胞层贴壁生产的方法 然而在工业放大生产的过 程中受到了其贴壁性能的限制以及消化过程也会增 材料与方法 加工艺的复杂性生产时间和成本因此迫切需要能 适应悬浮生长的细胞来满足扩大化的工业生产 实验材料 全悬浮细胞系的建立对于疫苗生产的产业化进程有着 细胞株及质粒的准备 本实验中所用的细胞 重要意义 株为犬肾上皮细胞系 已有 文 献 报 道 证 明人 类 的 基 因 细胞购自上海军科院研究所 细胞用含 与细胞的贴壁性能有关通过比较转染 有 胎牛血清公司 的培养基并置 于 培养箱中培养 了基因的细胞与未转染的贴壁的细 胞转染的细胞贴壁性能明显得到了降低而通过 人的全长基因的真核表达质 技术抑制基因的表达时其贴壁性能又得 粒购自公司货号 质粒 转化大肠杆菌后经摇菌扩增以小量提取试剂 到了增强 基因又称为属于