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食用菌生物学实验 张志瑾 实验一母种培养基配制及棉塞制作 一.实验目的 1、 掌握食用菌固化培养基的配制。 2、学会棉塞 的制作方法。 二、基本原理 食用菌母种分离、移接和斜面保存菌种都必须要制作相应的培养基，以备食用菌的培养、分离和保存之用。 培养基是根据各种食用菌在生长繁殖过程中对营养物质需求制成的，它可供给食用菌的C源、N源、水分、各种无机盐及生长物质等。 培养基的种类很多，本实验学习斜面培养基（PDA）制作。 三.实验准备 1.器具：??天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、棉花、线绳、牛皮纸、皮筋、纱布、电炉、菜刀、菜板、小铝锅等。 ?2．材料：??马铃薯、葡萄糖或蔗糖、琼脂、水。 四、实验内容 过程：制马铃薯滤液→融化琼脂→培养基的分装 →棉塞的制作 方法步骤： 1．配方（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15~20g，自来水1000ml，pH自然。 ?2．制作方法 （1）制滤液：??马铃薯刮去粗皮，去芽眼，切成碎块，称量后放锅中，加水1200~1300ml，将其煮沸20min。用双层纱布过滤，取1000ml滤液。 （2）化琼脂：??将滤液加热至将沸腾时加入琼脂，不断搅拌，注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待琼脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用热水补足水量）. 装量以不超过其容积的一半为宜）。注意管口或瓶口不要沾染培养基。 （4）制棉塞??棉花以白色长绒脱脂棉为宜。根据试管口大小取棉，将其卷成棉塞，最好 外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞塞入试管2/3。制做棉塞要求外表光滑，外包的纱不能折、松紧适宜等。 （5）?包扎：??管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆，棉塞部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 （6）、灭菌 （7）、摆斜面 （8）、存放冰箱（4-6C） ?六、作业 1、简述高压灭菌锅的使用。 2、何谓灭菌？简述热力灭菌的类型和原理。 3.何时加入琼脂？融化时注意什么问题？分装的技术要求有哪些？ ?4. 棉塞的作用有哪些和技术要求？菌种培养时管口堵胶塞或软木塞行吗？为什么？   实验二、食用菌接种环境的消毒、灭菌与斜面接种 一.目的及要求： 1.掌握食用菌斜面接种方法及无菌操作技术。 2、能正确分析自己的接种效果。 二、基本原理：食用菌斜面接种是食用菌栽培过程中最基本的方法之一，也是食用菌制种工作最重要的一个环节。因为在食用菌栽培过程中，一旦斜面接种污染，后面的工作将无法进行，故斜面菌种的接种、分离和移接非常重要，必须在严格无菌操作条件下进行，才能获得纯菌丝体（纯菌）。 三、实验准备 ?1.材料：空白斜面培养基（无菌检验 ）、母种等 2.器具：酒精灯、接种环、火柴、尖头镊、酒精棉球、大镊子、接种箱、超净工作台、高锰酸钾、37％甲醛溶液、紫外灯、2%来苏水、标签纸等。 ?四、实验内容 1、?接种环境的处理 2、母种的转管技术 五、方法步骤 1.接种环境的处理 （1）接种箱的熏蒸：??先用2%来苏清洁接种箱内外，放入接种所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空 间 一般用甲醛10ml，加半量高锰酸钾（5~7g）使甲醛氧化挥发。先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再注入甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。熏蒸25--30min。 （2）超净工作台的消毒：用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外灯，照射20-30分后使用。 2.母种的转管技术 （1）手及菌种管的消毒：用肥皂洗手，再用75％酒精棉球擦手和菌种管表面，在酒精灯焰上略烧试 管 外的棉塞后，立即将菌种管放入接种箱内。 （2）转管：两手从接种孔伸人接种箱内，酒精棉球擦拭接种环。左手持菌种管和斜面管，两支试管口对齐于火焰上方。右手持接种环或针和铲等，并将其在灯焰上干热灭菌，用小指及无名指拔掉棉塞，接种环冷却后伸入菌种管内取略豆粒大菌种块，迅速移人斜面培养基的中部。然后将棉塞在火焰上烧一下，立即塞入试管口，旋紧棉塞。接种环不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即贴标签，注明菌种名称及接种日期，再进行适温培养。 实验三、食用菌母种制作分离技术 一、目的要求 1、明确食用菌无菌操作技术要点。 2、掌握食用 菌母种分离技术。 二、基本原理：食用菌母种分离方法较多，但主要采用组织和孢子分离，所不同的是前者取子实体某块组织，后者取子实体的孢子经过培养形成的纯菌丝体（纯种）。 三、实验准备 1.材料：空白斜面培养基(空白培养无菌).食用菌子实体等 2.