选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

* * 课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。 土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌能利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、 梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 课题背景 CO（NH2）2 　　　　2NH3 ＋ CO2 ＋ H2O 脲酶 一、研究思路（一）筛选菌株 筛选菌株、统计菌落数目、设置对照 （一）筛选菌株 1、实例： PCR技术 DNA多聚酶链式反应是一种在体外 将少量DNA大量复制（PCR）的技 术，此项技术要求使用耐高温 （93 ℃ ）的DNA聚合酶。 　　去哪里找？为什么？ 原因：因为热泉温度70～80℃，淘汰了绝大多数微生物， 　　　 只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去寻找。 热泉 2、实验室中微生物的筛选 （1）原理： 　　 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、 温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 （2）方法： 抑制大多数微生物的生长； 促进目的菌株的生长 （3）结果： 培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。 一、研究思路（一）筛选菌株 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： 思考： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖 氮源：尿素 ③从用途看此培养基属于哪类？ 选择培养基－－允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。 ④能筛选出哪类微生物？为什么（或如何进行筛选）？ 　　培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制。 所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4·7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 一、研究思路（一）筛选菌株 ⑤怎样证明此培养基具有选择性呢？ 一、研究思路（一）筛选菌株 以尿素为唯一氮源的培养基 牛肉膏蛋白胨 培养基 是 分离 尿素细菌 判断该培养基有无选择性 实验组 对照组 培养基类型 是否接种 目的 结果 只生长 尿素细菌 生长 多种微生物 是 组别 （二）统计菌落数目： 想一想：你在必修3学习了哪种测定微生物数量的方法？ 1、显微镜直接计数： 　 利用血球计数板（血细胞计数板），在显微镜下 计算一定容积里样品中微生物的数量。 缺点：不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 一、研究思路（二）统计菌落数目 2、活菌计数法－－稀释涂布平板法 （1）原理： 　　在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个活细胞（活菌）。 （2）公式：每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， 　 　V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL） M代表稀释倍数。 一、研究思路（二）统计菌落数目 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL） （ 　 ） A. 2.34×108　　　B. 2.34×109　　C. 234　　D. 23.4 B 练习 公式：每克样品中的菌落数＝（C÷V）×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， 　 　V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）， M代表稀释倍数。 一、研究思路（二）统计菌落数目 说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验