放射性免疫分析技术在药代动力学研究中的应用.pptVIP

放射性免疫分析技术 张玉民 2012.02 放射性免疫分析技术的类型 放射性免疫分析技术的基本原理 放射性免疫分析技术在PK,PD分析中的应用 放射性免疫分析技术的类型 1 竞争性结合分析法(radioimmunoassay,RIA)是体外放射分析技术中建立最早、应用最广的一类竞争性体外放射分析技术。 2 非竞争分析法(immunoradiometric assay,IRMA) IRMA是从放射免疫分析RIA的基础上发展起来的核素标记免疫测定，其特点为用核素标记的抗体直接与受检抗原反应并用固相免疫吸附剂作为B或F的分离手段。IRMA于1968年由Miles和Heles改进为双位免疫结合，在免疫检验中取得了广泛应用。 RIA的基本原理 放射性标记抗原与非标记抗原（包括标准抗原或待测抗原）与有限量的特异性抗体发生可逆性竞争结合 ,这种竞争可用以下反应式来表示： 反应体系中同时存在*Ag、Ag和Ab，而*Ag的量一定、Ab的量固定，而且Ag+*Ag＞＞Ab时，随着Ag的增加，*AgAb的量相应减少，即与Ag（包括标准抗原或待测抗原）的量呈负相关。当反应达到平衡后，将反应体系中的标记抗原-抗体复合物与游离的标记抗原分离，测定其放射性。以标准抗原的浓度为横坐标，以标记抗原-抗体复合物的结合率（B/T、B/F、或F/T）为纵坐标，绘制剂量反应曲线，也称剂量效应曲线（calibration curve）。 抗原与过量的标记抗体在液相反应后加入免疫吸附剂，即结合在纤维素粉或其他颗粒载体上的抗原。游离的标记抗体与免疫吸附剂结合被离心除去，然后测定上清液的放射性量。双位点IRMA的反应模式如图： 受检抗原与固相抗体结合后，洗涤，加核素标记的抗体，反应后洗涤除去游离的标记抗体，测量固相上的放射性量。 不论是单位点还是双位点IRMA，最后测得的放射性与受检抗原的量呈正比。 RIA与IRMA的区别 放射性免疫分析技术在PK,PD分析中的应用 GLUCAGON RIA Kit——E-4的临床药动学分析 Rat PTH IRMA Kit ——甲状旁腺素的临床药代动力学研究 GLUCAGON RIA Kit 试剂盒成分： A. Glucagon Assay Buffer 0.2M Glycine, pH 8.8, 0.03M EDTA, 0.08% Sodium Azide, and 1% RIA Grade BSA B. Glucagon Antibody C. 125I-Glucagon D. Glucagon Label Hydrating Buffer E Glucagon Standards（400 pg/mL） F. QC1 2 G. Precipitating Reagent Goat anti-Guinea Pig IgG Serum, 3% PEG and 0.05% Triton X-100 in 0.05M Phosphosaline, 0.025M EDTA, 0.08% Sodium Azide 操作步骤 GLUCAGON RIA Kit的方法确证 标准曲线： QC: Rat PTH IRMA Kit 1 RAT PTH ANTIBODY COATED BEADS 2 125I LABELED RAT PTH ANTIBODY 3 RAT PTH STANDRADS 4 RAT PTH CONTROLS 5 WASH CONCENTRATE 操作步骤 1 pipet 200 μl of standrad，control or sample into appropriately labeled tubes. 2 pipet 100μl 125I labeled Rat PTH antibody into all tubes. 3 vortex all tubes. 4 add one bead to all tubes,incubate tubes at room temperature for 18 to 24 hous. 5 wash all tubes twices,count each tubes in gamma counter. Rat PTH IRMA kit 的方法学确证 QC: