黄颡鱼脑p2450芳香化酶基因的克隆和组织表达.pdfVIP

　第 29 卷第 5 期 水 　产 　学 　报 Vol . 29 , N o . 5 　 2005 年 10 月 　　　　　　　　　 　　 　　　　　　 　　　　　 Oct . , 2005 　 J OURNAL OF FISHERIES OF CHINA ( ) 文章编号 : 1000 - 0615 2005 05 - 0591 - 08 黄颡鱼脑 P450 芳香化酶基因的克隆和组织表达 1 ,2 2 2 2 徐 　跑 , 　俞菊华 , 　李建林 , 　夏德全 ( 1. 南京农业大学无锡渔业学院,江苏 无锡 　2 14081 ; 2 . 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 ,江苏 无锡 　2 14081) ( ) 摘要 : P450 芳香化酶 P450arom 是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶 。本文采用 RTPCR 和 RA CE 法 , 首次 分离和克隆了黄颡鱼脑 P450 芳香化酶基因 HP450aromB , 并使用荧光实时定量 RTPCR 对其组织表达进行了研 究 。结果表明 HP450aromB cDNA 全长2080 bp (不包括p oly (A) ) , 5 ′端非翻译区有25 bp ,3 ′端 555 bp (不包含p oly ( ) ) ( ) A , 阅读框 op en reading frame , ORF 1500 bp ,编码 500 个氨基酸 , 推测的蛋白质分子量为 56 kDa 。同源性分 析显示 , HP450aromB 的氨基酸序列与其它鱼脑 P450arom 具有 70 % 以上的同源性 , 与其它鱼卵巢 P450arom 为 60 %左右同源 , 与人胚盘和鸡卵巢 P450arom 则为 50 %左右同源; 但芳香化酶高保守区包括 I螺旋区, 芳香化酶 特异保守区 II 及血红素结合区 III 和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为 83 % ～96 % , 78 % ～86 %和 85 % ～ 100 % 。系统发育分析表明 HP450aromB 与鱼类脑 P450arom 属于同一分支的, 并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类 地位最近 ,这和传统的分类一致 。实时定量 RTPCR 研究显示 , HP450arom B 在前脑 , 下丘脑 , 垂体 、卵巢 、精巢 均有表达 ,在肝脏没表达 ,表达量脑部高于性腺 ,但雌雄鱼脑部 HP450arom B 的表达总量没显著差异 。 关键词 :黄颡鱼; P450 芳香化酶; cDNA 末端快速扩增法; 系统发育; 组织表达 中图分类号 :Q786 　　　文献标识码 :A Molecular cloning of neural P450arom and its expression in Pelteobagrus f ulvidr aco XU Pao1 ,2 , YU J uhua2 ,