粗毛栓菌漆酶酶谱的分析.doc

XXX 本科生毕业设计（论文） 题　　目 粗毛栓菌漆酶酶谱的分析 姓　　名 XXX 学号 XXX 系 别 生命科学系 专　　业 生物工程 指导教师 XXX 职称 教授 2010年 月 日 XXX教务处制 目 录 摘要…………………………………………………………………………………1 关键词…………………………………………………………………………………1 Abstract…………………………………………………………………………1 Key words ………………………………………………………………………1 引言………………………………………………………………………………1 1材料 …………………………………………………………………………1 1.1菌种 ………………………………………………………………………1 1.2 PDA培养基 ………………………………………………………………1 2方法 …………………………………………………………………………1 2.1粗酶的制作 ………………………………………………………………………1 2.2等电聚焦酶谱分析 ……………………………………………………………1 2.2.1仪器 ………………………………………………………………………2 2.2.2试剂………………………………………………………… ………………2 2.2.3溶液配制 ……………………………………………………………………2 2.2.4装管……………………………………………………… ……………2 2.2.5装槽………………………………………………………… ……………2 2.2.6电泳………………………………………………………… ………………2 2.2.7剥胶………………………………………………………… ………………2 2.2.8拍照 ………………………………………………………………………2 3.结果与讨论………………………………………………………………………2 参考文献……………………………………………………………………………3 致谢…………………………………………………………………………………3 粗毛栓菌漆酶的酶谱分析 生物工程专业学生 XXX 指导教师 XXX 摘要 对粗毛栓菌粗酶液进行的等电聚焦显示至少存在4种漆酶的同工酶。 关键词 粗毛栓菌，漆酶，等电聚焦，酶谱 Zymography of laccases in Trametes gallica Fr. Abstract：The result showed that at least four laccse isoenzymes from Trametes gallica Fr.was abserved on the isoelectric focusing zymogram. Key words：Trametes gallica, laccase, isoelectric focusing ，ZymogramTrametes gallica Fr. 1.2 PDA培养基 称取去皮马铃薯200g/L，加适量水煮沸20min，用纱布过滤得滤液，加入葡萄糖 20g，琼脂粉15g，补足水至1,000 mL，混匀，融化，分装，121℃灭菌20min。此培养基主要用于粗毛栓菌的保存。 2 方法 2.1 粗酶液的制备 菌种经麦草培养基培养30天后，将培养物取出，加去离子水，浸泡4h，然后用六层纱布过滤，取上清液。 2.2 等电聚焦酶谱分析 2.2.1仪器 DYY-8C型电泳仪（北京六一仪器厂）、圆盘电泳槽DYCZ-27B、电子天平、移液枪。 2.2.2试剂 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、两性电解质Ampholine、过硫酸铵、TEMED、H2SO4、NaOH、琼脂糖、愈创木酚。 2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶溶液配制 1、 丙烯酰胺贮液 29克丙烯酰胺和1克甲叉双丙烯酰胺溶于水，定溶至100mL，滤去不容物后存于棕色瓶。 2、聚丙烯酰胺凝胶配方（胶终浓度7.5%）取4.4mL丙烯酰胺贮液，加入1.1mLAmpholine（40%，pH 3-10），12mLdH2O，17.6uLTEMED（10%），17.6uL过硫酸铵（10%），粗酶液80uL。 2.2