内分泌学-激素测定技术.docVIP

第二章 激素测定技术 体内的激素水平是反映内分泌代谢功能状态的直接指标,也是诊断内分泌代谢疾病的重要依据之一。但体液中绝大多数激素的含量很低，用一般化学方法很难检测到。1959年，Yalow等首次用建立的放射免疫分析法（radioimmunoassay, RIA）测定血浆胰岛素，从此开创了激素测定技术的新纪元。RIA在临床内分泌代谢疾病的诊断中得到了迅速推广和应用，极大地推动了内分泌学等生命科学的发展。 随着RIA的应用，50年代及前期开展的缺乏敏感性和特异性的化学比色法和生物法相继被取代，特别是随着材料科学技术、蛋白质制备技术和单克隆抗体杂交瘤技术的应用和进步，又极大地推动了激素测定技术的迅速发展和更新换代。继RIA后，Males等又于1968年建立了用放射性核素标记抗体的免疫放射分析法（immunoradiometric assay, IRMA），该法的检测灵敏度比RIA高10~100倍，特异性更强，且方法更简便易行；1970年，Lefkowite等首先报道了ACTH的放射受体分析法（radioreceptor assay, RRA），进一步拓宽了放射性核素标记技术测定激素的应用范围。但在RIA的发展过程中也暴露了放射性核素对人体有害和污染环境、标记物容易衰变和测量仪器昂贵等缺点。1966年，Nakane等首次建立了用酶取代放射性核素标记抗体与底物显色的方法，标志着酶免疫分析法（enzyme immunoassay, EIA）的诞生；1971年，荷兰学者van Weeman和瑞典学者Engvall等建立了酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），在建立EIA和ELISA的早期，由于受多种因素的影响，其检测灵敏度和准确性不够理想，仅限于对物质的定性和半定量分析，在含量甚微的激素定量测定中不能与RIA或IRMA相媲美。但到80年代后期，酶免疫分析技术取得了突破性进展，相继建立了酶联免疫反应与 “杂交”的酶联免疫荧光分析法（enzyme-linked immunofluorometric assay, ELIFA）、生物素-亲合素系统（biotin-avidin system, BAS），与传统的ELISA相结合的BAS-ELISA、酶免疫反应与化学发光检测系统相结合的增强发光酶免疫分析法（enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA）和克隆的酶供体免疫分析法（cloned enzyme donor immunoassay, CEDIA）等多种新型的酶免疫分析技术不断出现。现在酶免疫分析技术已发展为形式各异，各具优点和用途的定位、半定量和超微定量分析技术，与放射性核素标记免疫分析技术（RIA、IRMA和RRA）相比，其最大优点是酶标记物的有效期长（可超过一年）和稳定性好，不同批次试剂盒之间变异小；与放大系统联用时，检测灵敏度明显高于放射性核素标记技术，可达10―19mol/L水平，且无放射性。据估计，原有的绝大部分（80%以上）放射性核素标记免疫分析法的测定项目已被酶免疫分析法等非核素标记免疫分析技术所取代。 随着科学技术的进步，又进一步发展建立了许多新的免疫分析技术，如荧光免疫分析法（fluorescence immunoassay, FIA）、时间分辨荧光免疫分析法（time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）、化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CLIA)、electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA）和免疫多聚酶链反应（immuno-polymerase chain reaction, IPCR）技术等。1983年，Pettersson等首次报告用TRFIA测定HCG，该法解决了FIA存在的自然本底荧光干扰问题，其特异性明显提高，灵敏度可达10―17mol/L，高于放射免疫分析法，且无放射性危害，标记物稳定，检测速度快，经十多年的发展，实现了全自动化测定，精密度更好，可自动检测的激素已达30余种。自70年代中期由Arakawe等首次报道CLIA以来，该法从实验室的稀有技术逐渐过度到临床医学的常规检测技术，在最近十余年获得了快速发展。它是利用免疫反应系统和化学发光系统相结合的产物，检测灵敏度可达10―18mol/L，测试简便快速，已实现全自动化分析，可测的激素项目达几十种之多。ECLIA不同于一般化学发光分析技术，它采用电促发光原理，能产生高效、稳定的连续光源供检测，试验步骤大大简化，反应时间短，测定速度快，检测灵敏度达10―12mol/L，能满足临床的诊断要求，已有几十种激素和各种抗原或抗体的