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间接荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)对抗双链DNA的检测结果比较
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间接荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)对抗双链DNA的检测结果比较
李珍1 刘洋1 王俊芳2
(1新疆伊犁州中医院风湿科研究室 新疆伊宁 835000)
(2伊宁市友谊医院检验科 新疆伊宁 835000)
【摘要】目的 探讨分析间接荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)对抗双链DNA的检测结果差异。方法 选取2013年在我院确诊或疑似系统性红斑狼疮(SLE)患者70例作为研究对象,清晨空腹抽取所有受试者的静脉血液4ml装入2个干燥清洁的试管内,每个试管2ml,对试管进行标记(编号、IIF或ELISA等),离心处理后妥善保存,当天进行检测。每位受试者的样品均接受IIF法和ELISA法的检测。结果 IIF法检测4例阳性,ELISA法检测9例阳性,两种方法阳性检出率差异明显,plt;0.05,具有统计学意义。结论 IIF法和ELISA法各有特点,临床检测应该灵活选择,充分发挥两种方法的优势。
【关键词】间接荧光法 酶联免疫吸附法 抗双链DNA IIF ELISA dsDNA
【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2014)08-0262-02
系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多系统或器官病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,其病因至今尚未有统一定论。由于抗dsDNA抗体在SLE患者中特异性较高,因此被用于临床诊断SLE疾病 [1]。我们选取2013年在我院确诊或疑似系统性红斑狼疮(SLE)患者70例作为研究对象,使用IIF法和ELISA法的检测受试者血样,现将结果报道如下。
1. 资料和方法
1.1 背景资料
选取2013年在我院确诊或疑似系统性红斑狼疮(SLE)患者70例作为研究对象,其中男性45例,女性25例,年龄为21~87岁,平均年龄为31.6岁。
1.2 检测方法
清晨空腹抽取所有受试者的静脉血液4ml装入2个干燥清洁的试管内,每个试管2ml,对试管进行标记(编号、IIF或ELISA等),离心处理后妥善保存,当天进行检测。每位受试者的样品均接受两种不同方法的检测。
IIF法的主要步骤包括,将血清稀释(1:10),严格按照试剂盒的说明进行操作,最后使用荧光显微镜观察检测结果。阳性结果为绿蝇短膜虫动基体均质或边缘亮度增强。使用抗人IgG作为二抗,检测的也是IgG。
ELISA法的主要步骤包括,将血清稀释(1:20),严格按照试剂盒的说明进行操作,检测样品抗dsDNA的IgG抗体。使用洗板机洗板,显色终止,在酶标仪上进行测试(波长450nm,参考波长620nm)。
1.3 统计学方法
使用SPSS 13.0处理所有数据,统计分析方法使用卡方检验,plt;0.05,为差异统计学显著。
2. 结果
我们的检测结果显示IIF法检测4例阳性,ELISA法检测9例阳性,两种方法阳性检出率差异明显,plt;0.05,具有统计学意义,见附表1。
附表1 两种方法检测结果对比
检测方法 例数 阳性例数 阳性检出率
IIF 70 4 5.71%
ELISA 70 9 12.86%
P值 lt;0.05
3. 讨论
系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多系统或器官病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,其病因至今尚未有统一定论。本病可能通过遗传、性激素、环境及免疫学等机制发病,并且可合并其他自身免疫性疾病[2]。
由于抗dsDNA抗体在SLE患者中特异性较高,因此被用于临床诊断SLE疾病。间接免疫荧光法(IIF)主要使用绿蝇短膜虫动基体进行检测,只含有环状dsDNA不含其他细胞核抗原,因此特异度较高,也是免疫学检测方法中敏感性最强的方法[3]。
酶联免疫吸附法(ELISA)使用生物提取dsDNA作为基质,由于制备方法的局限,可能产生ssDNA抗体,进而引起非特异性反应,最终导致检测结果假阳性较多[4,5]。
我们使用IIF和ELISA 两种方法对SLE患者的血液样品进行检测,结果显示两种方法阳性检出率差异明显。说明两组方法存在较大差异,临床不能互相替代。但是考虑到两种方法各有其特点,如ELISA 虽然特异性较低但是操作方便、费用低廉,因此可以用于大量样品的筛选。IIF检测操作复杂,费用比较昂贵,因此可以用于小量样品的复查。IIF法和ELIS
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