生物制药 第二章 生物制药技术通论 模块01 生物药物的制备技术.ppt

第二章 生物制药技术通论;第一节 生物药物的制备技术;生物材料;选择原则： 1、来源丰富、成本低、目的物含量高、易于分离纯化的材料 材料来源丰富，而含量不高； 或材料来源丰富、含量高，但材料的杂质含量太多，分离纯化手续繁琐，以致影响质量和收率，反而不如采用低含量易于操作的原料； 2、种属特异性、发育阶段、生理状态、解剖部位等因素的影响 种属特异性影响到原料中待提取蛋白质的含量、结构、生物学活性及其抗原性。 例如：来源于猪垂体的生长素对人体无效，不能用于人体。 被提取蛋白质的原料中的含量还受到原料解剖部位的影响。 例如：猪胰脏尾部含激素较多，猪胰脏头部含消化酶较多，单独收集胰头提取消化酶，收集胰尾提取激素，有利于提高产率。;二、生物材料的预处理—— 组织与细胞的破碎方法;2、物理法 常用方法：反复冻融法、急热骤冷法、超声波处理、加压破碎法。 反复冻融法是先将样品深冷至－20～－15℃使之凝固，再缓慢地融化，反复多次可使大部分细胞及细胞内颗粒破坏，常用于处理动物性材料，但脂蛋白会变性失活。 急热骤冷法是将样品投入沸水中，于90℃左右加热数分钟，立即置冰水浴中使其迅速冷却，则绝大多数细胞被破坏。 超声波处理是利用超声波产生的机械振动使细胞破碎，适用于微生物材料。其缺点是可导致对超声波敏感蛋白失活，另外超声波产生的热量亦可能使热敏蛋白质失活。 加压破碎法是利用气压或水压破碎细胞，每小时可以处理数十乃至数千升的样品，适用于微生物发酵工业的生产。;三、提取技术;（二）提取方法;1、水溶液提取;2、表面活性剂提取;3、有机溶剂萃取;3、有机溶剂萃取;4、双水相萃取技术;双水相的形成;;5、超临界流体萃取技术;CO2超临界萃取装置;四、固液分离技术;（一）过滤分离技术;重力过滤;加压过滤;真空过滤;离心过滤;（一）过滤分离技术;过滤介质;RETURN;（二）离心分离技术;离心机;不同转速离心机比较;离心转速与离心力;五、分离纯化技术;（二）分离纯化原理 P19;;（三）选择原则;（四）分离纯化方法;1、沉淀技术Precipitation 沉淀可分为晶形沉淀和非晶形沉淀两大类型。 生物大分子沉淀有其特殊的性质，是利用溶解性不同实现分离，属于非晶形沉淀，为分子凝集作用的结果。;（1）盐析沉淀法;①原理 两种现象： 盐溶：低盐情况，盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大。 盐析：高盐，盐离子强度增加，蛋白质溶解度减小。;盐析沉淀法;②盐的选择 盐析能力：半径小的高价离子在盐析时的作用较强，阴离子的盐析效果比阳离子好，尤其以高价阴离子更为明显。 PO4 3-＞SO42―＞CH3COO―＞Cl―＞NO3―＞I― NH4+＞K+＞Na+＞Li+ 常用：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等;③盐的浓度 各种活性成分分子的颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不相同。 常用“饱和度”来表示中性盐的的浓度。如：25℃时(NH4)2SO4的饱和浓度为4.1 mol/L，定义它为100%饱和度。 操作：直接投固体粉末、加入硫酸铵饱和溶液。;盐析沉淀—硫酸铵饱和度表;④影响盐析的因素 A．不同溶质， B．溶质的浓度， C．pH值， D．温度。;⑤盐析方法 1、分部盐析法 2、重复盐析法 3、反抽提法 一定的盐浓度下将目的蛋白夹带一定量的杂蛋白一同沉淀。 将沉淀用较低浓度盐溶液平衡，溶出其中的杂蛋白。 ;分部盐析法;反抽提法(RNA聚合酶);⑥注意事项 A．防止“局部过浓” B．温度 （室温） C．沉淀需要经一段老化时间后进行分离。;（2）等电沉淀法;等电沉淀法;（3）有机溶剂沉淀法;有机溶剂沉淀法;（4）成盐沉淀法;;（5）选择性变性沉淀法;选择性变性沉淀法;2、膜分离技术;膜分离技术类型;（1）透析;透析袋 ;③透析过程及注意点;透析袋 使用方法;透析;（2）微孔滤膜过滤技术;②应用;③设备类型;注射式过滤器;全玻璃微孔滤膜过滤器;平板滤器;筒式滤器;④操作与注意事项;（3） 超滤技术;中空纤维滤芯;;;②超滤装置;;固定相：表面积很大的或多孔性固体。如凝胶、树脂等。 流动相：液体或气体。分为液相色谱和气相色谱。;层析技术的分类;（1）吸附层析;;优点： A.设备简单、操作简便、价廉、安全。 B.少用或不用有机溶剂，吸附过程中pH变化小，较少引起生物活性物质的变性失活。 缺点： A. 选择性差，收率不高。 B.一些无机吸附剂性能不稳定。 ;几种常用的吸附剂;大孔吸附树脂可分为非极性、中等极性、极性和强极性吸附剂四类。 美国罗姆-哈斯公司：Amberlite系