基层培训免疫学技术PPT.ppt

第五章 常用免疫学检验技术 ;临床免疫检验是运用免疫学基本的基本原理和技术，检查临床标本中的微生物抗原、肿瘤抗原以及相应的微生物抗体、自身抗体，为感染性性疾病、肿瘤、自身免疫病以及免疫缺陷提供诊断依据。;免疫检验分为两个部分，一部分为利用免疫检测原理检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质，另一部分是利用免疫检测原理检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。这些检测结果为临床上确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供了有效的实验依据。 ;第一节 免疫学检验原理、特点和方法 ?;一、免疫学检验原理 （一）抗原抗体反应是抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。它既可发生在体内，也可发生在体外。在体内发生的抗原抗体反应即为体液免疫应答的??应作用。体外的抗原抗体结合反应，根据参与反应的抗原的物理性状（可溶性或颗粒性）以及参与反应的条件（电解质、补体等）不同，表现出不同的现象，如沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合和毒素中和等。一般将检查血清中病原微生物抗原和抗体的试验称为血清学试验。 ;2、比例性 比例性（proportionality）是指抗原与抗体特异性结合反应时，生成肉眼可见结合物的量与反应物浓度的关系，只有当二者浓度比例适当时，才出现可见反应。抗原抗体分子比例合适的范围，称为抗原抗体反应的等价带。在此范围抗原抗体结合充分，沉淀物形成得快而多。;在等价带的前后，由于抗体和抗原的过量，上清液中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少。当抗体过量时，称为前带，抗原过量时称为后带。因此，在抗原抗体反应的试验中，如果没有产生肉眼可见的抗原抗体复合物出现，一方面要考虑是否有抗原与相应的抗体存在，另一方面还必须注意到两者反应的比例是否适当。 ;3、可逆性 抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性称为抗原抗体结合的可逆性（reversibility）。由于抗原抗体的结合是分子表面的非共价键结合，故形成的复合物是不牢固的，在一定的条件下可以解离，所以说抗原抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一动态平衡过程。 ;抗原抗体复合物解离取决于两方面的因素：一是抗体对相应抗原的亲和力；二是环境因素对复合物的影响。亲和力高的抗体与抗原表位在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不容易解离，反之，亲和力低的抗体与抗原形成的复合物较易解离。环境因素中的过高或过低均可破坏离子间的静电引力，使抗原抗体的结合力下降。增加离子强度，也可使静电引力消失，降低抗原抗体的结合力，促使其解离。解离后的抗原和抗体仍然保持游离抗原、抗体的生物活性。 ;（三）影响抗原抗体反应的因素 影响抗原抗体反应的因素较多，主要有两方面：一是反应物自身的因素，另一方面是反应环境的因素。 ;1、反应物自身因素 （1）抗原 抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数目均可影响抗原抗体反应的结果。如颗粒性抗原与相应抗体结合后产生凝集现象；可溶性抗原与相应抗体结合后产生沉淀现象；单价抗原与相应抗体结合后不出现沉淀现象。 ;（2）抗体 ①来源 来源于不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清，由于具有较宽的等价带，与相应抗原结合易出现可见的抗原抗体复合物。马、人的免疫血清等价带窄，抗原不足或过剩，均易形成可溶性复合物。单克隆抗体一般不适合用于凝集和沉淀反应。;②浓度 抗体的浓度往往是与抗原相对而言，二者合适的浓度才易出现可见的反应结果。 ③特异性和亲和力 特异性与亲和力是影响抗原抗体反应的关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。诊断试剂应尽可能选高特异性、高亲和力的抗体，才能提高试验的可靠性。 ;2、反应的环境条件 （1）电解质 抗原抗体结合后，由亲水性向疏水性转换过程中必须要有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，破坏水化层，使复合物相互靠拢聚集，形成大块凝集、沉淀。若无电解质存在，则不出现可见反应。在抗原抗体反应中，通常使用0.85%NaCl溶液或各种缓冲液作抗原抗体的稀释液及反应液。 ;（2）酸碱度 抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行，pH过低或过高都会影响抗原抗体的反应。抗原抗体反应中一般以pH6～9为宜。有补体参与的反应pH为7.2～7.4，超过这个范围会降低补体的酶活性而影响反应。 ;（3）温度 抗原抗体反应需要合适的温度才有利于二者结合。一般以15～40℃为宜，最适温度为37℃。在此范围内，温度越高，抗原抗体分子运动越快，碰撞接触机会越多，两者结合反应速度越快。但是如果温度高于56℃，会导致抗原抗体复合物解离，甚至分子变性。温度越低，反应速度越缓慢，但抗原抗体结合越牢固，易于观察。 ;（4）振荡 在抗原抗体反应中，适当的振摇可促使抗原抗体分子的