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研究内容 （围绕研究目标） 1）合成可通过血脑屏障且同时具有脑胶质瘤靶向的纳米基因载体，在PEG化的脂质体的PEG尾端加以抗TfR抗体和CTX修饰。 2）检测载体的表征、稳定性和其负载DNA的能力，通过体外细胞转染实验研究其细胞靶向性和转染效率。 3）在大鼠脑胶质瘤模型上静脉注射免疫脂质体/CTX/hTERTC27复合物，活体观察外源性基因在脑、肝脏、肾脏等组织的表达情况，并在特定的时间点处死大鼠检测胶质瘤生长情况，以及在组织标本上验证基因的分布特点。 拟解决的关键问题 1）制备综合性能优良的载体：载体的制备是本课题的关键问题，要将TfR抗体和CTX以适当的比例成功地连接于PEG末端形成稳定的复合载体，并要控制其粒径在100nm（适合穿过血脑屏障的范围）左右，所以要进行一些反应条件的摸索，找出最适合的反应浓度和时间。 2）载体的DNA释放能力：免疫脂质体/CTX能介导DNA跨过血脑屏障，特异性地到达胶质瘤分布区后要能将携带的DNA释放进入细胞核。 3）该新型载体进行基因治疗能达到更好的治疗效果：将免疫脂质体/CTX/hTERTC27对颅内胶质瘤模型鼠进行静脉注射，该载体基因复合物应能特异性进入脑内胶质瘤细胞并在胶质瘤细胞中表达，从而产生治疗效果。 什么是关键问题？ — 研究过程中对达到预期目标有重要影响的某些研究内容或因素。 — 为达到预期目标所必须掌握的关键技术或研究手段。 撰写要求：找出关键问题，问题清晰，分析透彻，合理的解决方法。 紧密围绕解决科学问题和项目内容 可靠性第一，先进性第二 突出关键技术的描述 列出关键参考文献（包括自己） 流程图放在详细方案之后，便于一目了然 研究方案 可行性分析 －强调解决科学问题的能力， 1. 工作基础 （参见研究基础部分） 2. 关键实验技术 （方法、模型和材料） 3. 实验条件 4. 科研梯队 5. 必要的交流与合作（国内、国外） 可行性分析－举例 （1）有一个组成合理实力较强的研究队伍 该项目的研究队伍是由教授、副教授、讲师和研究生组成的层次梯队合理的研究团队，其中项目申请人在美国和香港进行研究工作多年，具备主持大型科研项目的能力和经验。所有研究人员都经过了研究生的培养过程，具备协同项目主持人完成该项目的能力和经验。 （2）具有理论可行性 非病毒载体，尤其是纳米载体，是近年研究的热门领域，PEG化的免疫脂质体，可以显著降低肝脏和脾脏巨噬细胞的摄取和延长在血液循环内时间（stealth技术），还能避免颗粒自身聚集，有效降低颗粒大小，有效拮抗血清对基因转染的抑制。总的来说，PEG化具有延长脂质体的循环半衰期、增加溶解性、增加稳定性、减少毒性等效应。载体的靶向性又是研究的重点，用TfR抗体和CTX双重修饰PEG化的免疫脂质体，通过TfR抗体介导血脑屏障的跨细胞转运，和CTX介导的肿瘤靶向，使载体特异性地将hTERTC27介导进入胶质瘤分布部位，有望获得理想的靶向效果和基因转染效率，更有效地治疗胶质瘤。 （3）有良好的前期研究和合作基础 我们与中山大学化学与化工学院的帅心涛教授合作5年，已经建立Wistar大鼠脑内胶质瘤模型，使用FA-PEG-PEI作为载体，介导TRAIL/CD双基因治疗大鼠胶质瘤，得到较满意的结果，该研究已在BBRC上发表文章一篇。 （4）该项目的研究条件和仪器设备 本课题是一跨学科的研究，将以中山大学附属第二医院和中山大学化学与化工学院为平台完成整个实验过程，另外，本校医学院中心实验室和生命科学院还能提供有关科研服务。因此，本课题已具备了开展研究的各项条件，可以确保实验顺利进行。 ? 创新是灵魂，是评判标书学术水平的关键 包括： 新的理论 新的体系 新的规律 新的方法 源头创新：原始性 唯一性 有进一步发展的前景 跟踪和应用创新：下游、支流，独特风光、开花结果 创 新 性 本项目的特色和创新之处 ---举例 （1）迄今为止，鉴于血脑屏障的限制，国内外对脑胶质瘤的基因治疗的研究多采用动物的皮下成瘤模型，或用原位脑胶质瘤模型，但采取原位注射基因治疗。我们开发的新型纳米载体既能通过血脑屏障，又对肿瘤细胞具有靶向作用。鉴于此新型载体的特性，我们通过静脉给药到达肿瘤部位达到治疗目的，这在国内外尚属首次，将为寻找适合临床应用的基因治疗方法提供理论和实践依据。 （2）交叉学科纳米医学是近年研究的热点，纳米载体凭借其低毒、高效负载、靶向性和智能控释等优点在基因治疗中