高效液相色谱法测定复方苦参子洗液中蛇床子素含量 王颖.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱法测定复方苦参子洗液中蛇床子素含量 王颖 王颖（广西柳州市柳铁中心医院药剂科 545007） 【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）20-0185-01 【摘要】 目的 建立测定复方苦参子洗液中蛇床子含量的高效液相色谱法（HPLC）。方法　色谱柱：Turner C18柱；流动相：甲醇-水-磷酸(65：35：0.1)流速：1.0 mLbull;min-1；柱温：30℃；检测波长：322 nm；进样量：20 mu;L。结果　蛇床子素进样量在0.4 2～4.2ug范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9996)，平均回收率为98.20％，RSD=1.68％(n=6)。结论　用HPLC测定蛇床子素含量，方法简单、准确，重复性好。 【关键词】 高效液相色谱法 复方苦参子洗液 蛇床子 复方苦参子洗液是由苦参、蛇床子、地肤子、黄柏、白花蛇舌草等组成的复方制剂。蛇床子为该药的有效成分之一，具有燥湿、祛风、杀虫作用。本课题组采用HPLC对复方苦参子洗液中蛇床子素的含量进行测定，以便对该制剂的质量进行控制。 1. 仪器与试剂 美国Waters 2695-UV2489 液相色谱仪，AEU-210型电子天平(日本岛津公司)；蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110822-2008)，参子洗液样品由龙门参子药厂提供(批号20101132，甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。 2. 方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：Turner C18柱（200mmtimes;4.6mm，5mu;m）；流动相：甲醇-水-磷酸(65：35：0.1)；流速：1.0mL／min；检测波长：322 nm；进样量：20 uL；柱温：30℃。 2.2对照品溶液：精密称取蛇床子素对照品4.2mg置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，浓度为420mu;gbull;mL-1。 2.3供试品溶液：精密吸取样品溶液20mL，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，60℃以下蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液 2.4阴性供试品溶液：制备不含有蛇床子的参子洗液作为阴性样品 3. 方法学考察 3.1干扰试验：精确吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 uL，依说明书进样测定；结果表明，阴性供试品色谱中在与蛇床子素对照品保留时间相应的位置无色谱峰，说明处方中其他药味对测定无干扰。见图1 3.2线性关系 分别精确量取上述蛇床子素储备液5 mL 置10、25、50、100 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得浓度为42、84、4.2、21mu;gbull;mL-1的对照品溶液；精确量取上述对照品溶液系列及对照品储备液各20mu;L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=4.018times;104X-4.329，r=0.9996。结构表明蛇床子素在0.42～4.2mu;g的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。 3.3精密度测定 精确吸取上述蛇床子素对照品溶液20mu;L，连续进样5次，测定峰面积。其RSD 为1.31%（n=5）。表明仪器精密度良好。 3.4重复性测定 取同一批样品5份，通过高效液相色谱仪，测定峰面积。RSD=1.49%（n=5），重复性良好。 3.5回收试验 精密吸取已知含量(9.443 0ug／mL)的样品6份，每份10 mL，精密加入蛇床子素对照品适量，进样测定含量，测定平均回收率为98.20%，RSD=1.68％(n=6)。 3.6样品含量测定 分别精确吸取3批样品20ml，通过高效液相色谱仪，测定峰面积。批号20101132品中蛇床子素含量分别为9.38 ug／mL、8.96 ug／mL、9.15 ug／mL。 4.讨论 蛇床子是复方苦参子洗液的组成部分之一，而蛇床子素又是蛇床子活性最强的成分，故本试验以蛇床子素含量为测定指标。目前蛇床子素的含量测定方法有薄层扫描法[1]、分光光度法[2]、气相色谱法[3]和高效液相色谱法[4]等。本文采