2013年国际生物奥林匹亚国手选拔营实作试题第1试场.pdfVIP

考生編號 分數 2013 年國際生物奧林匹亞國手選拔營實作試題 第 1試場  請確認考生編號是否與您的考號相同。  本實作測驗包含植物生理與植物形態兩個部分，建議你先瀏覽兩部分的實驗 操作內容，妥善規劃操作時間，以順利完成所有實作內容 。  實驗所需要的器材及藥品都已放在桌上，請按照下面的清單清點。若有缺少 者，請舉手告訴評審老師，桌上的器材及藥品用完後，將不再補充 。  公用儀器運用，請依照實驗桌上指示使用。  本測驗兩個部分配分各占 50 分，總分100 分。  本試卷（含封面、試題卷）共6頁，於交卷時全部繳回。  作答時間共 90 分鐘，請於本卷上作答。  試題答案可寫至題目背面，但請註明並標上題號。  實驗完畢後，請清理桌面。 第一部分：【 C3 與CAM 途徑的生理差異檢測】 一、器材及藥品： 器材及藥品 數量 器材及藥品 數量 植物材料(A 、B) 各些許 鑷子 一支 液態氮(低溫物質，操作時眼 一瓶 小試管（部分貼上 十個 睛勿靠近 ) 標簽 A 、B ） 研砵及杵 二 組 小試管架 一個 緩衝液 3 ml 小試管 含( 浮船) 一個 反應液 A(不含NADH) 4 ml 藥杓 二支 反應液 B含( NADH) 4 ml 秤藥盤 二個 微量 分注器(1000µl 、200 µl) 各一支 廢液 杯 一個 微量吸管 (1000 µl 、200 µl) 各一盒 冰浴 一盒 單面刀片 一支 油性筆 一支 電動天平 (共用) 二臺 手套(M) 一雙 UV 分光光度計(共用) 二臺 計時器 一個 蒸餾水 一瓶 1 二、原理說明： 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 (PEPCase)是判斷 C3 與CAM途徑的生理差異的檢 測方法之一，其功能為固定二氧化碳。 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 (PEPCase)活性分析，是以磷酸烯醇式丙酮酸 (Phosphoenolpyruvate ，PEP)為基質，產物為草醋酸(oxaloacetate ，OAA) ，草醋酸 + 透過蘋果酸去氫酶(NAD -MDH)進一步與NADH作用，形成蘋果酸(malate)與 NAD+ ，NADH在波長 340 nm有吸收高峰，因此檢測波長 340 nm的吸光 (OD) 值 之衰減現象可推估PEPCase的活性。 PEPCase PEP + HCO3-—————→ OAA + NAD -MDH OAA + NADH ——————→ malate + NAD+ 三、操作 步驟： PEPCase活性檢測 ：(粗體字部分請務必遵守) 1. 托盤中放入單面刀片、鑷子以及植物材料A 、B葉片樣品各少許 ，欲秤取植 物樣品時請舉手，向助教領取天平之號碼牌 ，待輪到該號碼時助教會另行通 知 。(注意，A 、B