第九章 免疫标记技术PPT.pptx

第四章 免疫标记技术;免疫标记技术（immunolabelling technique）;免疫标记技术;第八章 免疫标记技术;第八章 免疫标记技术; 1986年Miles和Hales建立免疫放射分析技术（immunoradiometric assay，IRMA） 标记抗体作示踪剂，在反应系统中加入过量的抗体，待测物（或标准品）和同位素标记抗体全量反应。 优点： 灵敏度高（可提高6-10倍）、准确度高、重复性好、检样量少 缺点： 干扰因素较多、检测仪器贵、有放射性污染;第一节 放射免疫技术 ;一、放射免疫技术的原理;第一节 放射免疫技术 ;二、放射免疫技术的基本条件 ;1．抗原标准品与待测抗原 ;2. 特异性抗体;3. 放射性同位素;4. 常用的同位素标记方法;5. B与F的分离技术;分离剂的要求 ;（1）双抗体沉淀分离法 ;（2）化学试剂分段沉淀分离法;（3）固相法 ;（4）吸附法 ;第一节 放射免疫技术 ;三、放射免疫技术??基本类型;1. RIA法;2. 经典IRMA法;3. 双抗体夹心法;4. 二抗标记法;5. 双标记抗体法;第八章 免疫标记技术;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、免疫荧光技术的基本类型;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、免疫荧光技术的基本类型;Albert Hewett Coons（1912—1978）; 三结合： 抗原抗体反应的高度特异性 荧光的敏感可测性 显微技术的高度精确性 优点： 特异性强、敏感性高、速度快，结果直观，可以检测和定位微量抗原 缺点： 荧光易发生淬灭，荧光染色标本保存困难、易出现非特异性染色问题，镜检结果判定客观性不足 ;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、免疫荧光技术的基本类型;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;1．荧光素 ;荧光素的性质;荧光的种类;常用的荧光素;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;2. 荧光标记物的制备;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;3. 荧光检测仪;（1）荧光显微镜 ;荧光显微镜; 荧光显微镜的种类 透射式 落射式;荧光显微镜的主要部件;;;落射荧光显微镜的构造;激发滤光板;落射荧光显微镜各部件特性和作用;落射荧光显微镜各部件特性和作用;吸收滤光板;吸收滤光板;FITC结合物一般可用激发滤光板BG12与吸收滤光板OG4或GG9 RB200结合物一般可用激发滤光板BG12与吸收滤光板OG5;落射荧光显微镜原理;（3）流式细胞仪 ; FCM是目前分析细胞学最具代表性的先进仪器，是流体喷射技术、激光技术、γ-射线能谱技术、电子计算机以及显微荧光分光光度计等高技术密切结合的高级精密仪器。;;（1）样品处理和输出系统 （2）光子和物理参数检测系统 （3）电子读数和数据处理系统;;;4.66%;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、免疫荧光技术的基本类型;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;1. 直接荧光抗体染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;2. 间接荧光抗体染色法;;;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;3. 补体荧光染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;4．特殊染色法 ;（1）双标记免疫荧光技术;细胞内双标记荧光染色;DAPI+FITC;（3）反衬染色法 ;（3）反衬染色法;第八章 免疫标记技术;一、酶免疫技术的原理 二、酶免疫技术的基本条件 三、酶免疫技术的基本类型;一、酶免疫技术的原理 二、酶免疫技术的基本条件 三、酶免疫技术的基本类型;酶催化反应原理;酶免疫技术（enzyme immunoassay，EIA）;一、酶免疫技术的原理 二、酶免疫技术的基本条件 三、酶免疫技术的基本类型;二、酶免疫技术的基本条件;二、酶免疫技术的基本条件;1. 标记酶 ;;二、酶免疫技术的基本条件;２．酶标记物的制备;戊二醛交联法;过碘酸氧化交联法 ;二、酶免疫技术的基本条件;3. 酶底物的选择;二、酶免疫技术的基本条件;4. 固相载体的选择;二、酶免疫技术的基本条件;