生物化学精品教学（河南科技大学）y11、12 血清TG、Tch、ALT测定.pptVIP

* 血清TG、Tch、ALT测定 河南科技大学医学院 生物化学与分子生物学教研室 【目的】 【目的】 掌握酶法测定血清甘油三酯的原理及其操作。 掌握酶法测定血清总胆固醇的原理及其操作。 掌握血清谷丙转氨酶(ALT)测定的原理，熟悉标准曲线制作的方法。 熟悉血清TG、Tch、ALT测定的临床意义。 【原理】 一、血清甘油三酯浓度测定【原理】 用脂肪酶或脂蛋白脂肪酶(LPL)使血清中甘油三酯(TG)水解，生成甘油和脂肪酸,甘油在甘油激酶催化下，生成磷酸二羟丙酮和H2O2，然后用Trinder反应测定，计算血清中TG含量。反应过程如下： (LPL－脂蛋白脂肪酶；GK－甘油激酶；GPO－磷酸甘油氧化酶；POD－过氧化物酶) 醌亚胺为红色物质，颜色深浅与H2O2浓度成正比。 甘油三酯 + H2O 甘油 + 脂肪酸 甘油 + ATP 甘油-3-磷酸 + ADP 甘油-3-磷酸 + O2 磷酸二羟丙酮 + H2O2 H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 4-氯酚 醌亚胺(红色) GK LPL GPO POD 【操作】 加入物(ml) 测定管 标准管 空白管 血清 0.05 — — 甘油三酯标准液 — 0.05 — 蒸馏水 — — 0.05 酶工作液 3.0 3.0 3.0 混匀后，在37℃保温15分钟，然后用分光光度计在505nm(480~520nm)波长处，以酶试剂为空白液调零，读取各管吸光度值。 取三支干净试管，分别标明测定管、标准管和空白管，然后按下表加样： 【操作】 【结果记录及计算】 记录A测、A标值，按下列公式计算各管TG浓度。 正常值范围：1.71mmol/L(150mg/dl) 临界值： 1.71~2.26 mmol/L(150~200 mg/dl) 高甘油三酯症：2.26 mmol/L(200 mg/dl) 【参考值】 【注意事项】 【结果记录及计算】 标本应新鲜无溶血血清或血浆。血清放置时间长可使游离甘油升高。 若样品中甘油三酯含量过高，用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数，本法线性范围一般在11.29 mmol/L以内。 由于样品中存在游离甘油，为得到真正的甘油三酯值，应将计算所得的值减去0.11 mmol/L(10mg/dl)。 血清甘油三酯(mmol/L)＝ × 2.26 － 0.11 测定管吸光度 标准管吸光度 【临床意义】 血清甘油三酯有随年龄上升的趋势，体重超过标准者往往偏高。糖尿病、肾病综合症、糖原沉积病和妊娠后期：可出现甘油三酯增高。先天性脂蛋白脂酶缺陷、脂肪肝以及其他肝病甘油三酯也增高。降低见于甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能降低和肝功能严重低下等。 【临床意义】 二、 血清总胆固醇浓度测定(酶法)【原理】 【原理】 胆固醇酯酶水解胆固醇酯后，以胆固醇氧化酶氧化胆固醇，产生H2O2，然后以Trinder反应测定，从而求其含量。反应过程如下： (CHE－胆固醇酯酶；CHOD－胆固醇氧化酶；POD－过氧化物酶) 醌亚胺为红色物质，颜色深浅与H2O2浓度成正比。 胆固醇酯 + H2O 胆固醇 + 游离脂肪酸 胆固醇 + O2 胆固醇-4-烯-3-酮 + H2O2 H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 4-氯酚 醌亚胺 + HCl + H2O CHOD CEH POD 【操作】 混匀，置37℃水浴箱保温15分钟，用分光光度计以空白管调零，在505nm(480~520nm)处测定各管吸光度值，以参考血清为标准计算结果。 取三支干净试管，分别标明测定、标准和空白管，然后按下表进行加样操作。 【操作】 加入物(ml) 测定管 标准管 空白管 待测血清 0.05 — — 总胆固醇标准液 — 0.05 — 蒸馏水 — — 0.05 酶工作液 3.0 3.0 3.0 【结果记录及计算】 【参考值】 【临床意义】 血浆总胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化的防治均有意义。胆固醇升高见于：原发性高胆固醇血症，糖尿病，肾病综合征，甲状腺机能减退，胆道阻塞等疾病；甲状腺机能亢进，长期营养不良时可降低。 【结果记录及计算】 记录A测、A标值，按下列公式计算各管Tch浓度。 血清总胆固醇(mmol/L)＝ × 5.26 mmol/L 测定管吸光度 标准管吸光度 正常血清总胆固醇：3.10~5.70mmol/L 兔血清：0.39~1.72mmol/L 【原理】 + 谷氨酸 丙酮