生物化学精品教学（河南科技大学）DNA的生物合成.pptVIP

pre-RC磷酸化导致在复制起点组装其它复制因子并起始复制，复制因子包括3种DNA聚合酶。 DNA聚合酶在复制起点按一定顺序组装：首先Pol ?和Pol ?结合，然后是Pol ?/引发酶。 在S期，pre-RC被蛋白激酶（Ddk和Cdk）磷酸化，从而被激活。 pre-RC的激活和组装真核DNA复制叉 （1）激活pre-RC，以起始DNA复制； （2）抑制形成新的pre-RC。 CDK控制pre-RC的形成和激活 真核细胞通过依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶（cyclin-dependent kinases，CDK）严格控制pre-RC的形成和激活。 Cdk功能： 在每个细胞周期过程中，仅有一次机会形成pre-RC，也仅有一次机会激活pre-RC。 pre-RC在被激活后即解体，所暴露的复制基因可形成新的pre-RC并迅速结合ORC。但在S、G2和M期，高活性的Cdk抑制pre-RC的其它组分结合ORC。只有当染色体分离和细胞分裂完成时，Cdk的活性消失，新的pre-RC才能形成。 The ORC is a protein complex that is associated with yeast origins throughout the cell cycle. Cdc6 protein is an unstable protein that is synthesized only in G1. Cdc6 binds to ORC and allows MCM proteins to bind. When replication is initiated, Cdc6 and MCM proteins are displaced. The degradation of Cdc6 prevents reinitiation. Some MCM proteins are in the nucleus throughout the cycle, but others may enter only after mitosis. 真核生物复制起始过程示意图 oriC 3? 5? ORC 3? 5? 3? 5? pol? MCM 细胞周期 调节信号 OH 5? HO 5? RPA 引物 RNA A：起始辩认复合物(ORC: origin recognition complex)结合到起始位点上。 C：在细胞周期的调节信号作用下，起始复合物被激活，解旋酶打开亲代DNA双链，形成 一个复制小泡。RPA (replication protein A)结合到暴露的单链上。解旋酶附着于DNA 上，小泡被扩大。 B：小核染色体维系蛋白(MCM: mini chromosome maintenance) 结合到上面。 E：RNA引物被聚合酶δ不断延长，脱氧核苷酸不断参入。 D：聚合酶α/引发酶 复合物合成第一个RNA 引物和短的DNA。 聚合酶? 聚合酶? ORC DNA拓扑异构酶 pol? MCM 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 后随链 引物 核小体 三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题 前导链产生完整的子染色单体。 后随链3?端留下缩短的未复制的ssDNA区。 端粒(telomere) 指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。 端粒的功能： 维持染色体的稳定性 维持DNA复制的完整性 端粒的结构特点： 由末端DNA序列和蛋白质构成。 末端DNA序列是多次重复的富含T、G碱基的短序列 5’-(TnGn)x-3?。 TTTTGGGGTTTTGGGG… 端粒 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 组成： 端粒酶（telomerase）是一种核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白质组成。 端粒酶以自己的RNA组分作为模板，以染色体的3?端ssDNA（后随链模板）为引物，将端粒序列添加于染色体的3?端。这些新合成的DNA为单链。 端粒酶催化作用的爬行模型 DNA聚合酶 ? ? ? ? ? ? - OH 3? - OH - OH - OH - OH 端粒 TTGGGGTT 5? 3? DNA - OH 3? G