第三章+3-1目的基因的获得.ppt

第三章 目的基因的获得－目的基因的分离克隆和方法;功能基因的4个特性： 1.基因有固定的一级结构 2.每个基因在染色体上占有特定的位置 3.每个基因有特定的转录模式 4.大部分基因都有功能 基因的分离与克隆方法： 1.根据基因的功能蛋白分离目的基因 2.根据mRNA特异性分离目的基因 3.根据DNA的插入作用分离目的基因 4.基因文库技术分离目的基因 5.图位克隆分离目的基因 6.酵母双杂交系统分离目的基因 ;第三章 目的基因的获得一.根据基因的功能蛋白分离目的基因 （一）技术路线 （二）相关技术 （三）基因分离 ;  ;（二）相关技术1.蛋白质分离纯化及双向电泳2.蛋白质氨基酸序列分析 ; 蛋白的分离纯化及双相电泳;1.盐析与有机溶剂沉淀：;分段盐析： 半饱和硫??铵溶液可沉淀血浆球蛋白，而饱和硫酸铵溶液可沉淀血浆清蛋白。 ;有机溶剂沉淀蛋白质： 凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。 沉淀原理： ① 脱水作用； ② 使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。 ;2. 透析法;3. 电泳： SDS; 等电聚焦电泳（IEF）;双向电泳;第三章 目的基因的获得（二）相关技术1.蛋白质分离纯化及双向电泳2.蛋白质氨基酸序列分析 ;蛋白质氨基酸序列分析 蛋白一级结构测定;蛋白序列测定的策略;四、多肽链的部分断裂和肽段的分离;1. 酶裂解法;五、肽段氨基酸顺序测定;六、肽段在多肽中次序的决定 ;氨基酸序列分析例子;  ;具有不同密码子的氨基酸;简并寡核苷酸探针库;利用抗体筛选表达文库（a）把原初平板上生长的嗜菌斑及其产生的融合蛋白质原位复印转移到硝酸纤维素滤膜上；（b）滤膜与第一抗体溶液一道温浴，漂洗后加放射性标记的第二抗体继续温浴；（c）放射自显影;第四部分 目的基因的获得