第三节 酶作用.ppt

第三节 微生物酶的生产;商品化酶制剂的来源: 植物酶制剂 动物酶制剂 微生物酶制剂;在1894年日本人高峰浪吉在美国创办Takamine工厂首次用米曲霉固体发酵生产“它卡淀粉酶”，作为消化酶。1917年法国Boidin 和Effromt以枯草杆菌生产淀粉酶，用于织物退浆。直到第二次世界大战以后，随着抗生素生产的发展，1947年日本开始采用液体深层发酵法生产α-淀粉酶，从此酶制剂的生产逐步转向了以微生物发酵生产酶。;利用微生物生产酶的优点;一、酶的生产菌种;目前主要商品酶制剂及其来源;产酶菌种的要求;1977年，联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）的食品添加剂专家联合委员会（JEFA）就有关酶的生产应用安全问题向21界大会提出了如下意见： 1、凡是从动植物可食部分组织或食品加工传统使用的微生物生产的酶，可作为食品对待，无须进行毒物学的意见，而只须建立有关酶化学与微生物学的详细说明即可。 2、凡是由非致病菌的一般食品污染微生物所制取的酶，需作短期毒性试验。 3、由非常见微生物制取的酶，应作广泛的毒性试验，包括慢性中毒在内。 ;为了节约钱，往往在确认安全的传统微生物筛选进行酶的开发，也可从菌种保藏机构获得菌种进行试验。以下为美国政府同意使用的食品用酶及生产菌种。;美国同意使用的食品用酶及生产菌种;菌种的分离;1.3菌种的培养 ;液体培养法： 在进行蛋白酶产酶菌株的筛选和培养时，培养基中加入一定的酪蛋白；培养α-淀粉酶时，培养基中加入可溶性淀粉（0.1％～0.5％）。培养后在菌落周围产生透明水解圈，水解圈越大，酶活力越高。 液体培养基 接种 分段发酵 检测酶活性 终止发酵 离心分离发酵液 后续处理;二、酶的发酵技术;氮源 酶制剂生产中的氮源有两种：其一是有机氮，常常利用农产品的籽实榨油后的副产品，如豆饼、花生饼、菜籽饼、玉米浆和蛋白胨等；其二是无机态氮，如硫酸胺、氯化铵、硝酸铵和磷酸铵等。 不同的氮源对微生物产酶有诱导和抑制作用，如蛋白胨对黑曲霉的酸性蛋白酶生产有很强的抑制作用；胺盐对一些霉菌和细菌蛋白酶的生产则有抑制作用；但以蛋白质为氮源往往对蛋白酶生产有促进作用，优于蛋白质的水解物；某些氨基酸对酶产生有抑制作用，有的却是促进作用，赖氨酸、天冬氨酸对泡盛曲霉产生酸性蛋白酶有刺激作用，蛋氨酸等含硫氨基酸对黑曲霉合成酸性蛋白酶有妨碍作用。 在微生物酶生产中，多数采用有机氮源和无机氮源配合使用才能取得较好的效果。 ;碳氮比; 无机盐: 产酶培养基常需添加一定量的无机盐，主要是P、S、K、Mg、Ca、Na盐等。 微量元素 产酶培养基中的微量元素有Fe、Mn、Zn、Cu、Co、Mo等。 生长因子: 其中包括氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶等，酶制剂生产中所需的生长因子，大多数是由天然原料提供，如玉米浆、麦芽汁、豆芽汁、酵母膏等。目前广泛采用玉米浆作为生长因子的原料。 产酶促进剂 : 在培养基中添加少量物质，能显著提高酶的产率，这类物质称为产酶促进剂。产酶促进剂大体上分为两类：一是诱导物；二是表面活性剂，如土温－20，80，其浓度在0.1％时能增加许多酶的产量。表面活性剂能增加细胞膜的通透性，处于气－液界面改善了氧的传递速度，还可以保护酶的活性。某些阴离子表面活性剂，如油酸等，对微生物有一定毒性，但对某些酶的增产却比非离子型的更加明显，油酸可使绿色木霉纤维素酶的产量提高100倍。生产上常常用非离子型的表面活性剂，如聚乙二醇、聚乙烯醇衍生物、植酸类、焦糖、羧甲基纤微素、苯乙醇等。但食品级酶用的表面活性剂需对人畜无害，而离子型的表面活性剂对微生物有害。; 2.2发酵条件对产酶的影响;pH对产酶的影响及其控制;调节pH的方法;（3）通风量对产酶的影响;溶氧控制的实例;（4）搅拌的影响;（5）泡沫的影响 ;三、酶制剂发酵生产方法;我国小型生产基本采用帘子曲或厚层通风制曲法生产，国外采用机械制曲法，生产效率为手工盘曲的72倍，达5740公斤／人·天。 固体培养法具有以下优点： ⅰ.单位体积培养设备中的产酶量高； ⅱ.节省劳动力； ⅲ.由污染引起的问题较少，易于管理； ⅳ.酶提取液的浓度可以调节； ⅴ.后处理设备少。;3.2液体发酵法;（2）液体深层发酵法;深层发酵;四、微生物蛋白酶生产工艺;微生物α-淀粉酶的生产工艺;枯草杆菌BF7658酶生产的培养基;五、国内酶制剂生产现状;近年来国内酶制剂的产量;种类;国内酶制剂存在的问题