红树林来源白浅灰链霉菌中生物碱类次级代谢产物研究及核糖体工程优化.pdfVIP

第31卷第l期 台 湾 海 峡 V01．31．No．1 IN 2012年2月 JOURNALOF0CEANOGRAPHYTAIWANSTRAIT Feb．．2012 红树林来源白浅灰链霉菌中生物碱类次级 代谢产物研究及核糖体工程优化 李晓玲1’2，游中元2，徐俊1…，徐岷涓3 (1．国家海洋局第三海洋研究所、海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005；2．上海交通大学生命科学技术学院， 上海200240；3．上海交通大学系统生物医学研究院、系统生物医学教育部重点实验室，上海200240) 摘要：综合应用SephadexLH．20柱层析、反相中压液相柱层析、正相硅胶柱层析等方法对白浅灰链 霉菌(Streptomyces 用紫外吸收、核磁及质谱等波谱方法对结构进行解析和鉴定，确定了两个化合物结构，分别为2一喹 啉酸酯和4(1H)喹唑酮；基于核糖体工程原理，对该野生型菌株进行抗链霉素和抗利福霉素突变 的相应峰几乎中断消失．本研究显示针对红树林微生物中丰富的生物碱类次级代谢产物，可通过定 向化学分离和核糖体工程优化，快速锁定其中微量的新颖结构类群并对其产量进行调控，为后续分 离新天然产物打下基础． 关键词：海洋生物学；红树林；白浅灰链霉菌；次级代谢产物；核糖体工程 DOI：10．3969／J．ISSN．1000—8160．2012．01．022 中图分类号：P735 文献标识码：B 红树林是生长在热带、亚热带海岸潮问带，受周 物的产量很低．通过454高通量测序方法测定了该 期性潮水浸淹，以红树植物为主体的潮滩湿地木本 菌株基因组的大部分序列，得到该菌株的基因组草 生物群落．红树林生态系统包括红树、细菌、真菌、放 图．运用生物信息学的手段对基因组序列进行了开 线菌、微藻、无脊椎动物、鸟类、哺乳动物等，其中微 放阅读框的鉴定、功能推断，并以抗生素生物合成基 生物为重要的生物资源¨o．放线菌是抗生素的主要 因簇中常见的聚酮合成酶、非核糖体多肽合酶等基 产生菌，一般适宜生存于干燥、偏碱性的环境，而红 因为靶向，分析了MGR072菌株基因组中抗生素生 树林放线菌长期生存于干湿交替、强酸性、高盐的环 物合成基因簇的多样性．结果证明MGR072菌株具 J． 境，形成了独特的生长代谢调控机制和化学防御机 有产生多种抗生素的潜能H 制，具备形成新颖的次级代谢产物的潜能． “核糖体工程”技术利用各类抗生素抗性突变 近年来从红树林环境分离放线菌已成为研究热 为筛选标记来表征核糖体和RNA多聚酶的功能变 xiamenensis)、 点，已报道的厦门链霉菌(Streptomyces 化，能从“转录”和“翻译”两个水平激活微生物细胞 avicenniae)等新种都来 白骨壤链霉菌(Streptomyces 的生物合成潜能．该技术简单易行、组合方便，可通 源于我国福建漳州云霄漳江口红树林旧引．我们在 过筛选抗性突变而高效获得活性化合物高产突变 前期研究中获得了一株白浅灰链霉菌(Streptomyces株，以及激活菌株产生新活性产物，在微生物资源潜 albogriseolus)MGR072菌株，该菌株发酵产物的有力挖掘等方面有良好的应用前景¨引． 机试剂提取物表现出一定抗菌活性，但次级代谢产 本研究对白浅灰链霉菌MGR072次级代谢产 收稿日期：2011-03-03 基金项目：国家自然科学基金资助项目；教育部留学归国人员科研启动基金资助项目；教育部高等