试验动物转基因鸡血液基因组DNA提取和纯化-中国医学科学院医学.PDFVIP

中国实验动物学会 团体标准 《实验动物 转基因鸡模型检测核酸定 性PCR检测方法》 编制说明 联 系 人：韩凌霞 联系电话 编制单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 时 间： 2017年1月 5 日 中国实验动物学会团体标准 《实验动物 转基因鸡模型检测 核酸定性PCR 检测方法》编制说明 一、任务来源 本标准由中国实验动物学会提出，中国实验动物学会实验动物标准化技术委员会归口， 根据中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会 （以下简称专委会）有关文件及 GB/T16733 《国家标准制定程序的阶段划分及代码》和 《采用快速程序制定国家标准的管理 规定》的要求，结合实验动物专业具体情况，特制订本工作程序。由中国农业科学院哈尔滨 兽医研究所负责起草。 二、标准制定背景 转基因动物是指通过遗传工程技术在基因组中导入外源基因，能在基因组中稳定整合 并遗传给子代的一类动物。转基因鸡模型在生命科学领域有广泛的应用，如作为生物反应器 在鸡蛋中表达医用和保健蛋白、抗病育种及用于胚胎发育生物学基础研究等。 核酸，特别是DNA，由于具有较高的稳定性及以DNA 为靶标的检测技术具有较高灵 敏度和特异性，被广泛应用于转基因成分检测实践中。定性PCR 检测技术是基于PCR 扩增 的一种最常见的DNA 检测技术。该检测技术具有灵敏度高、特异性强等特点，因此成为国 家标准、农业部公告及出入境检验检疫行业标准等推荐的主要的转基因检测技术被广泛采 用。 对于外源核酸的检测，主要采用的方法是聚合酶链式反应扩增，即依据转入外源基因 的启动子、目的基因、终止子及表达重组载体信息，设计特异性引物，进行聚合酶链式反应， 依据产物的有无或多少判断是否为转基因产品。 针对转基因鸡模型的特殊性与重要性，国内现行的标准中没有对转基因鸡血液DNA 提 取和纯化方法和技术要求进行规范。由于不同研究用的提取和纯化DNA 方法不同，可能造 成DNA 提取质量无法保障。因此，对转基因鸡血液DNA 提取和纯化进行规范，制定符合 我国目前研究水平和应用要求的转基因鸡血液DNA 提取和纯化的标准，为试验结果的可靠 性提供保障，进而满足生物学、医学、免疫学等研究的需要。 三、主要工作过程 1、前期准备阶段 2008年，国家自然基金面上项目“慢病毒介导的表达抗流感RNAi、Mx 基因转基因鸡 研究”获得立项，在该项目中，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所承担了建立 转基因鸡制备技术平台，获得表达抗流感Mx-RNAis基因的转基因鸡模型，本项目的研究促 进了转基因鸡模型的制备和应用，这些相关科研项目的实施为本标准的研制奠定了基础。 2、项目启动阶段 2016年12 月，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所根据“中国实验动物学会团体标准管 理办法”要求，正式启动标准制订工作。 3、形成标准草案 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所在表达抗流感Mx-RNAis 基因转基因鸡等模型构建 和筛选的基础上，结合转基因鸡模型应用过程中的经验，形成标准草稿。 四、标准编制原则和主要技术内容确定的依据 本标准的编制遵循下列原则： 1、保证标准修订过程的科学性。 2、保证标准执行过程的可操作性。 3、充分考虑我国国情，符合我国技术发展水平。 制定本标准的依据 本部分以国务院批准 1988年国家科委2 号令公布的 《实验动物管理条例》、1997 年国 家科学技术委员会和国家技术监督局联合颁布的 《实验动物质量管理办法》和2016年修订 的 《农业转基因生物安全评价管理办法》为依据，同时参考 《GB/T 19495.1-2004 转基因产 品检测 核酸定性PCR 检测方法》、《GB/T 19495.1-2004 转基因产品检测 通用要求和定义》、 《GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测 实验室技术要求》、《GB/T 19495.7-2004 转基因产品 检测 抽样和制样方法》制定而成。 与现行法律、法规、标准的关系 参考 《GB/T 19495.1-2004 转基 因产 品检测