第十八章 免疫学检测技术及其应用.ppt

第十八章 免疫学检测技术及其应用 第一节 抗原或抗体的体外检测 抗原-抗体反应：antigen-antibody reaction。是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合的反应。 血清学反应：serological reaction。指体外的抗原-抗体反应。 特异性：亲和力、亲合力、交叉反应 可逆性 可见性 阶段性 电解质 酸碱度 温度 三、抗原-抗体反应类型和检测方法 中和反应 凝集反应 沉淀反应 补体参加的反应 免疫标记技术 （一） 凝集反应（agglutination） 1. 直接凝集反应： 颗粒性抗原+相应抗体→凝集 玻片法：细菌及ABO血型鉴定 试管法：肥达氏反应 2. 间接凝集反应 抗原吸附于载体+相应抗体→凝集 常用载体：乳胶颗粒、羊红细胞 3. 间接凝集抑制试验 将可溶性抗原与相应抗体预先作用，再加入相应的致敏颗粒。 4. 抗人球蛋白试验（Coombs试验） 用途：检测单价抗体 直接Coombs试验：检测结合在Rh+红细胞上的单价抗体； 间接Coombs试验：检测游离的Rh单价抗体。 （二） 沉淀反应(precipitation)  3. 对流免疫电泳 原理：将双扩与电泳技术结合在一起，测定可溶 性抗原。 阴极 阳极 （-） （+） 电泳 电渗 4. 火箭电泳 将单向免疫扩散与电泳技术结合，可快速测定标本中可溶性抗原的含量。 5. 免疫电泳 先电泳分离标本中抗原成分，再沿电泳方向挖抗体槽，加抗体，进行双扩。用于血清蛋白及抗体成分的分析及抗原/抗体提取物纯化鉴定。 6. 免疫比浊法 该技术是利用抗原－抗体复合物在液相中形成浊度来测量抗原含量的方法。 方法： 透射光比浊法 散射光比浊法 免疫乳胶比浊法 速率抑制免疫比浊法 （三）补体参加的反应 此类反应是利用抗体与红细胞表面相应抗原结合后，使反应体系中补体激活导致红细胞破坏，出现溶血现象建立的。 补体结合实验： 待测抗原＋待测抗体（待测的反应系统） 补体 抗体＋红细胞（指示系统） 溶血空斑试验 HLA血清学分型法：即补体依赖的微量细胞毒实验 （四）免疫标记技术 抗原抗体反应与标记技术结合，定位、定量、定性测定。 标记物：荧光素、酶、放射性核素、化学发光物质、胶体金等。 类型：免疫荧光技术、免疫酶技术、同位素标记技术等。 1 . 酶免疫测定法 是用酶标记Ab进行的抗原抗体反应。 常用的酶：辣根过氧化酶、碱性磷酸酶 常用底物：邻苯二胺（OPD） 常用方法：酶联免疫吸附试验(ELISA) 免疫组化法 （1）酶联免疫吸附试验（ELISA） 夹心法（测抗原） 间接法（测抗体） ELISA(双抗体夹心法-测Ag) （2）酶联免疫斑点试验（ ELISPOT ） 用于效应细胞分泌单一细胞因子的测定。 （3）BAS-ELISA 生物素-亲和素系统（BAS）是一生物放大系统，利用亲和素-生物素-酶的连接关系，追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，检测相应的抗体或抗原，灵敏度高。 （4）免疫组化技术 Immunohistochemisty Technique 是用标记的已知抗体与组织或细胞表面相应抗原结合发生反应，对抗原进行定位、定性或定量检测的技术。 2. 免疫荧光法(异硫氰酸荧光素、藻红蛋白) 直接法 ：用已知荧光标记的抗体检测未知抗原。 间接法： 用荧光标记的抗抗体，检测未知的抗原/抗体。 补体法： 3. 放射免疫测定（RIA） 将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来的技术，测定激素和药物。 常用I125和I131 快速，敏感（pg)，但污染环境，有一定的危害性。 4. 免疫胶体金技术（ICS） Immunological colloidal gold signature 是用胶体金颗粒标记抗体或抗原，用以检测未知抗原或抗体的技术，可用于多种液相免疫测定和固相免疫分析。 免疫层析法：immunochromatography 免疫层析法操作和原理 ①首先将已知特异性抗体固定于硝酸纤维素膜