CLSI系列文件---用患者样本进行方法比较和偏差估计(EP9-A2).docVIP

用患者样本进行方法对比实验及偏差评估 在日常工作中，实验室常常会投入使用一些新的方法、试剂、仪器，但是在使用它们之前，往往需要对其进行一些评价，其中重要一项就是和实验室目前使用的方法、试剂、仪器进行方法对比实验，以确定新方法、试剂、仪器测定的结果偏差是否在允许的范围之内。为此，美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS，现更名为临床实验5天，实验者亦可根据仪器的简单或复杂程度适当增减，直到确信可操作仪器为止。 2.方法对比实验 2.1对比方法的选择 实验者在选择对比方法的时候应注意如下几点：①测定结果与测试方法结果使用相同的单位；②精密度优于测试方法；③可分析测试范围（analytical measurement range，AMR）宽于测试方法；④如果条件允许，对比方法测定过程应不受已知干扰因素的影响，并已知其相对于参考方法的偏差。由于参考方法的准确度、精密度已经被充分证实，且干扰因素少、系统误差小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，还有适当的灵敏度、特异性、直线性及较宽的分析范围，因此有条件的实验室可选用参考方法作为对比方法。 2.2 测试样本的选择 2.2.1样本数目和样本量 本实验至少需要40个患者的样本，随着样本数的增多，本实验统计评价的可信度也会提高。此外，每个样本还应获得足够的量，在实验过程中有如下三个方面需要使用到样本：①用对比方法进行双份测定；②用测试方法进行双份测定；③准备一定的样本量进行后续研究。如果无法从某个患者获得足够的样本量，则可以混合两个患者的样本（不超过两个）获得所需要的样本量，但是这两个患者必须具有相似的病史，且体内的分析物浓度应大致在相同水平（如果样本为全血，则在混合时需满足血清学的兼容性）。 2.2.2分析物浓度 样本中分析物浓度应尽可能宽地分布在仪器允许的检测范围内，特别是要覆盖医学决定水平，通常情况下，分析物浓度最低值应低于该分析物正常参考范围的下限值，而最高值应尽可能地高。EP9-A2文件给出了方法对比实验时各浓度区间里的样本数应占总样本数的百分比，如进行两种葡萄糖测定方法的比较时，葡萄糖浓度2.76mmol/L的样本应占10%，浓度在2.81-6.06mmol/L范围内的样本应占40%，浓度在6.12-8.27mmol/L范围内的样本应占30%，浓度在8.32-13.78mmol/L范围内的样本应占10%，浓度13.83mmol/L的样本应占10%，不同的分析物有不同的要求，实验者在收集样本时可以参照文件里的附表。 2.3实验过程 2.3.1样本分析次序及测试时间 将所有患者样本分成若干天测定，每天测定的样本数目应相等（一般是将40个患者样本分成5天进行测定，每天测定8个患者样本），每个患者样本应进行平行管测定，做双份第2次测定时，样本顺序应全部倒过来，如第1次序号为1、2、3……n，第2次序号应为n、n-1、n-2……1，对比方法和测试方法都按此实验。对于一个给定的样本，测试时间受分析物稳定性的影响，但是不论是任何分析物，对比方法或测试方法的测试时间都不应超过2小时。如果实验使用的是储存标本，应确保样本的储存条件可以维持分析物的稳定性。 2.3.2对数据进行初步检查及分析过程中的质量控制 在最后数据分析时，实验者不应使用仪器报警或实验过程中出现人为失误时收集的数据。如果同一方法内成对数据之间的差异较大，但是找不到差异产生的原因，可以保留使用这些数据。此外，在实验过程中实验者还应坚持实验室的日常质量控制程序，并保留质控图，如果某一天的该分析物的质控结果失控，则应重复该天所做的结果，直至获得需要的样本数目。 3.初步数据检查 3.1方法内离群点（within-method outlier）检查 首先按下面公式计算每一样本每一方法（X为对比方法，Y为测试方法）成对结果的差值（DXi和DYi）和差值的均值（和）： ， ；， 以4为DXi、4为DYi的可接受限，如果某个样本的DXi 或DYi超过了可接受限，则需再进行如下计算： ，；， 以4为、4为的 可接受限，如果该样本的或仍然 超过了可接受限，则该点被定义为方法内离群点。如果所有实验结果中只有1个方法内离群点，则可以删除来自该样本的所有数据后继续下一步实验。如果所有实验结果中有1个以上的方法内离群点，则应详细地分析其产生的原因，在解决相应的问题后重新测试这些样本，将测得的结果与其他合格的数据合并，但是需重新对所有数据进行方法内离群点检查，反之如果无法再测试这些样本时，则需重新收集全部数据。如果方法内离群点产生的原因无法确定，则应对仪器进行精密度测试，若不精密度值没有超过临床允许误差，则可以继续下一步实验，反之则应停止实验并通知仪器生产商。 3.2 将数据作图并目视观察