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Harpin蛋白研究及其应用 植物病理学 余 刚 Harpin 由植物革兰氏阴性病原菌编码产生的Harpin蛋白是激发植物过敏反应(HR)的主要因子,具有显著的诱导植物抗性和促进生长发育等多种生物学效应,同时也是研究植物抗病信号传导的理想模型。 已鉴定的Harpins 科学家以16个植物病原细菌harpin蛋白为代表,采用生物信息学方法,对harpin蛋白家族的特征进行分析。利用软件Lasergene 7.0统计分析Harpin家族的理化特性;利用在线软件CLUSTAL2.0.12进行蛋白的序列比对。 结果表明,Harpin蛋白家族的等电点在3.61～6.34之间,基因在402～1113 bp之间。富含甘氨酸,绝大多数甘氨酸的含量都在13%～25%之间,不含或含有少量的半胱氨酸。富含甘氨酸序列呈现特征性分布,序列GGG-GG(或者GG-GGG)不同程度地在部分harpin中出现。 来源不同种群的harpin分别具备保守序列： 黄单胞菌harpin的保守序列为QGISEKQLDQLL和ILQAQNGGG 欧氏杆菌的为GQFMDQYPE和PDDDGMT 丁香假单胞菌的为LIHEKLGDNFGASA。 根据分析结果,进一步将Harpin家族划分为Hpa、HrpN和HrpZ3个组群 Eden生物公司的研究小组的研究表明，Harpin处理后会引起拟南芥中Cl、Ca、K、H、Cu、Zn离子通道的激活，以及各种氧化酶的激活，包括ACC合成酶Cu/Zn超氧化物歧化酶、基质抗坏血酸氧化酶、C切乞n超氧化物歧化酶、Cu分子伴侣前体等等。这些因子在植物抗病信号通路中起着重要的作用。 Harpin在植物细胞中的作用位点 用酵母双杂交法从拟南芥cDNA文库中分离到一种特异性植物蛋白(Harpin Binding Protein 1 HrBP1)， HrBP1是一种新蛋白，被定位在植物细胞壁上，与己知任何有机体内的任何蛋白无同源性。 Hoyos等用荧光标记法结合激光共聚焦显微镜观察，发现HrpZpss在烟草悬浮细胞及活体细胞的结合位点位于烟草的细胞壁，去除细胞壁的原生质体不能与HrpZpss结合，用ca2+和果胶的鳌合剂EGTA处理悬浮细胞后， HrpZpss与细胞壁的结合受到抑制，因此，他们认为HrpZpss的作用位点在细胞壁上，它可能直接与细胞壁的果胶化合物结合，也可能通过Ca2+的参与 诱导植物抗病性 Harpin的一个重要特征就是可以激发烟草HR，而HR普遍认为是植物防卫反应的表现。事实上，许多研究已经表明Harpin处理植物后，可以诱导植物对多种病害的抗性 诱导植物抗虫、促进植物生长 Harpins还可以诱导植物抗虫，促进植物生长,过去一段时间的田间实验也证明，Harpin可以诱导40多种作物对60多种病害及20多种虫害的抗性，并且可以使许多作物增产10-45%。在离体叶片和活体棉花中，Harpin可以诱导棉花对蚜虫的抗性，促进番茄和烟草的生长。 Harpin在植物上的作用机理 与许多化学物质如INA、BTH、SA诱导的部分抗性相比，Harpins处理植物可以 获得多种有益效应的原因在于Harpins处理可以诱导多种抗性机制，激活多种植物防 卫通路。研究证明， Harpins至少可以激活三条以上信号通路，不同的信号通路介导了不同的生物学效应。 Harpins在植物上启动的信号通路 Harpins诱导植物产生的多种有益表型，是与多个的信号传导事件联系在一起的 Harpins在拟南芥上启动的基本抗病防卫信号通路。其中水杨酸引导植物抗病防卫，乙烯引导植物抗虫和生长加快，脱落酸引导植物抗旱 Harpin在育种中的运用 克隆并利用编码harpin 蛋白的hrp基因进行转基因育种是植物抗病基因工程研究中值得研究的一个问题 目前已获得抗晚疫病的转hrp基因马铃薯植株和转hrp的水稻，番茄。这些转hrp基因的植株表现出一定程度的对疾病的抵抗力以及生长速度加快等有益性状， 但其遗传稳定性及其抗病谱以及转基因植株的安全性等仍有待于进一步评价。 Thank You * 1992 年韦忠民等首先从Erwinia.amylovora中分离出一个激发植物过敏反应的蛋白，定名为harpinEa, 由hrpN 基因编码。 harpinEa 是由403 个氨基组成的亲水蛋白,分子量44 kD, 富含甘氨酸而缺少半胱氨酸,无四级结构, 对热稳定,100℃处理10 min 不会使其失活，对蛋白酶K 和紫外线敏感，可以引起烟叶的过敏反应(hypersensitive response) 以拟南芥Hrbp1为探针，已分别从烟草、小麦、