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Goldeneye16A试剂盒简介 基点认知有限公司 产品介绍 n        Goldeneye16A身份鉴定试剂盒是利用PCR扩增的方法在一个PCR反应体系里同时扩增16个位点（15个STR位点和一个性别决定标记）的短串联重复序列（STR, short tandem repeats）检测试剂盒，可运用于法医亲子鉴定、个体识别和人类学等研究领域。 n        Goldeneye16A试剂盒包括美国CODIS（Combined DNA Index System）即美国犯罪分子数据库所要求的全部13个位点。此外，本试剂盒特选了两个在中国人群中具有高度多肽性的5核苷酸重复基因座Penta E和Penta D，性别检测位点Amelogenin也包括在内，可检测每个样本的性别。Goldeneye16A试剂盒所选择的基因座可满足目前所有国际罪犯数据库的要求。 n        Goldeneye16A试剂盒提供了所有的扩增试剂和检测试剂，详细请见试剂盒组分。 n        Goldeneye16A试剂盒的优势（全部试剂，服务，足量等） n        Goldeneye16A试剂盒目前存在的不足（染料峰） Goldeneye16A试剂盒组分简介 1.  反应前试剂（包装盒为黄色）： a)     10xbuffer：长期保存置于－20°C，开启使用后2-8°C保存 b)       引物混合体系：25x，长期保存置于－20°C，开启使用后2-8°C避光保存 c)       dNTP：浓度为2.5mM，长期保存置于－20°C，开启使用后2-8°C保存，避免反复冻融。 d)       阳性对照：0.5ng/μl的A702022（女性人细胞株DNA溶于0.05％叠氮酸钠和缓冲液中）。长期保存置于－20°C，开启使用后2-8°C保存。 3.        反应后试剂（包装盒为蓝色）： a)        分子量内标：自主生产。用于计算产物片段的分子量大小，ROX（红色）标记，分子量从小到大依次为70，80，100，120，140，160，180，200，240，280，320，360，400，450，490，500bp。2-8°C避光保存。 b)        等位基因阶梯：用其来比对样本的基因型。由本实验室自主研发并生产。2-8°C避光保存。 c)        Matrix：具有四种颜色（红、黄、绿、蓝）的四个片段，用来进行光谱校正。 Goldeneye16A试剂盒中引物所采用的荧光标记物 FAM（蓝色，blue）标记：Amelogenin，vWA，D21S11，D18S51，PentaE位点 HEX（绿色，green）标记:D5S818,D7S820，D13S317,D16S539,FGA位点 TMR（黄色，yellow）标记：TH01,TPOX,D8S1179,D3S1358,CSF1PO,PentaD位点 其中，FGA和D21显示了相对常见的微变化（基因座间相差的长度不是重复次数的整数倍）。 质检标准 外观特性要求： 试剂密封良好； 包装管无破裂。 分型准确性 样本经待检试剂盒检验得到的基因型同已知基因型进行比较，分型结果一致合格；否则不合格。 模板范围（参考不同浓度梯度的阳性对照） 低至0.125ng的模板三次重复均能正常扩增而无位点丢失现象，低至0.0625ng的模板出峰率大于 20/30（可将各颜色检测域值设为25rfu）为合格；否则不合格。 模板量大于1ng时无影响正常分型的非特异性扩增片段为合格；否则不合格。 峰值均衡性（参考30个血液样本） 1.等位基因间的均衡性： 等位基因中峰值较低的除以峰值较高的，并以百分比表示。此值大于70％视为合格，否则不合格。 2.同一标记物的各位点之间峰值的均衡性： 将同一颜色中的杂合位点的两个峰值取平均值，纯合位点的峰值除以2。再将各个位点所得的修正峰值进行比较，选出最小值和最大值相除，以百分比表示。此值大于35%视为合格，否则不合格。 3.不同标记物的所有位点之间峰值的均衡性： 将所有位点中杂合位点的两个峰值取平均值，纯合位点的峰值除以2，随后将各个位点所得的修正峰值进行比较，选出最小值和最大值相除，以百分比表示。此值大于20%视为合格，否则不合格。 4.整体峰高：扩增样本的峰高范围应介于50rfu-6000rfu之间，理想峰高范围介于600rfu-2000rfu之间。 阴影带比例 统计样品所有基因座位的stutter（n-1）峰值与主峰峰值，并计算二者比值，数值小于17%为合格。 是否有非特异性条带 1.是否有加A不完全导致的双峰现象：无加A不完全现象或不影响分型结果（肩膀峰低于主峰峰高的30%），视为合格；否则为不合格。 2.是否有明显的染料堆积峰：如果无