【生物课件】生物化学与分子生物学实验原理--蛋白质的分离纯化(下)(ppt 111).ppt

生物化学与分子生物学实验原理（I）-蛋白质的分离纯化 高效液相-HPLC（High-Performance Liquid Chromatigraphy） The principle of chromatography 保留时间 从进样开始到达检测器所需要的时间. 在峰尖的位置测量 影响 tR 的因素有: 流动相的线形流速 色谱保留 色谱保留 被分析物 (样品成份) 在两相之间的平衡 Amobile Astationary 塔板理论Plate theory 将色谱假设为一个蒸馏塔,塔内有许多块塔板,样品各组分在每块塔板的液相和固相间进行分配. 理论塔板数模型(Theoretical Plate Model) 塔板数的确定 对塔板理论的讨论 柱效(Column Efficiency) 等同于理论塔板的柱高用来测量柱效( column efficiency) H = L / N 柱长单位必须在两相之间完全平衡 小的H 意味着更高的分离效率 L 是以米为单位的柱长度 N 为理论塔板数: 大的 N 较好 1. Thermal dynamic equilibrium 对分配系数的讨论 选择性(Selectivity) 理想地状况: 1 ? k ? 5 如 k 1, 洗脱太快以至于不能准确地确定 tR k 20意味着洗脱需要很长的时间. 目标: 分离度(Resolutio