中药青蒿代谢工程.pptVIP

不同转基因株系中青蒿素及相关代谢产物的比较 47% 79% 41% * 图中深紫色的为非洲疟疾高发区，左侧红色的南美疟疾高发区。 黄花蒿虽然在世界广泛分布，但其青蒿素含量随产地不同差异极大。四川和云南昆明的黄花蒿中的青蒿素含量在千分之五左右，是各个地区中含量最高的，其他地区的黄花蒿中的青蒿素含量都很低，无利用价值。据国家有关部门调查，在全球范围内，目前只有中国重庆酉阳地区武睦山脉生长的黄花蒿才具有工业提取价值。对这种独有的药物资源，国家有关部委从上世纪80年代开始，已明文规定对青蒿素的原植物、种子、干鲜全草及青蒿素原料药一律禁止出口。 愈伤组织中未测出青蒿素，带分化芽的愈伤组织伴随再分化芽的形成同时产生青蒿素，其含量约为干重的0.008%；愈伤组织经继代转接后再生苗，由再分化苗长成的开花植株，其青蒿素含量达干重的0.92%，比天然植株含量(0.52%) 有明显的提高；一般认为，未分化的愈伤组织和细胞培养物不能合成青蒿素，或只能合成微量的青蒿素。 大多数研究者在离体培养的根中检测不到青蒿素，但也有人报道，在根中能检测到微量的青蒿素；根中虽然不含青蒿素，但生根能明显增加芽培养物中的青蒿素含量；在不含激素的培养基中，芽持续生根，在有些株系中青蒿素的含量高达干重的0.28％。 转FPS基因发根的青蒿素含量较对照提高3-4倍。 转基因植株的青蒿素含量较对照提高2-3倍。 上中：转基因青蒿的基因组DNA印迹杂交；上右：转基因青蒿的基因组RNA印迹杂交；左下：转基因青蒿的酶活性大约是非转基因青蒿的2-3倍；右下：转基因青蒿青蒿素的含量比非转基因青蒿高24.2-34.4%（30%左右）。 左下图：1：蛋白质相对分子质量标准；2：含有pET30a+质粒的大肠杆菌诱导后的可溶性蛋白；3：含有pETADS质粒的大肠杆菌诱导后的可溶性蛋白；4：纯化的重组紫穗槐二烯合酶。右图：（A） 体外催化产物总离子流图；（B） 紫穗槐二烯标样质谱图（Wallarrt et al 2001）；（C）A 中峰1的质谱图 A. 不同ADS株系的青蒿素含量；B. 不同株系（ADS、GUS、AMSi）中倍半萜含量的比较；C.不同株系（ADS、GUS、AMSi）中 青蒿素及相关代谢物的比较；D. 几种萜类含量的比较，unknown 1, C15H24O; unknown 2, C15H22O2；dihydeoart B:二氢脱氧青蒿素； C. Ma et al. 123 unknown 1, C15H24O; unknown 2, C15H22O2 C. Ma et al. 123 RT-PCR检测中最左边为对照；转基因青蒿青蒿素含量的检测中，1为对照。转基因株系ASQ3和ASQ5 中青蒿素的含量分别增长了23.2％和21.5％。转基因青蒿中鲨烯含量比对照降低了20%左右。 转基因的植株的青蒿素含量比对照明显提高，T2提高了17.4%，，T3提高了40.4%，T9提高了49.0%，T10提高了54.9%（20-50%）；转基因植物的石竹烯含量与对照相比，降低幅度很大，T2降低了59%，T3降低了74%，T9降低了87%（60-80%） 中药青蒿的代谢工程 Artemisia annua (青蒿) 青蒿素 (Artemisinin) 目的意义 用途： 抗疟疾：青蒿素是世界卫生组织(WHO)推荐的目前最有效的疟疾治疗药物。 基于青蒿素的综合疗法(artemisinin-based combination therapies, ACTs)现在已经成为WHO推荐的疟疾治疗一线药物. * 2011年9月12日，中国科学家屠呦呦获得2011年度拉斯克奖(Lasker Award) “临床医学奖”。获奖理由是“因为发现青蒿素——一种用于治疗疟疾的药物，挽救了全球特别是发展中国家的数百万人的生命”。这也是至今为止，中国生物医学界获得的世界级最高大奖。 * 全球疟疾感染者分布图：每年有5亿人感染疟疾，其中有近100万人不幸死亡。 * 青蒿的资源分布 青蒿(Artemisia annua L.)，其分类学上中文学名为黄花蒿, 属于菊科(Compositae)蒿属(Artemisia)一年生草本植物。 黄花蒿 (Artemisia annua L.) * 青蒿素的生产 青蒿素生物合成途径 及调控机制的研究 工程微生物 化学合成 细胞工程手段 转基因植物 (青蒿、烟草等) 传统育种 青蒿素产量 青蒿素价格 * artemisinin IPP Proposed biosynthetic pathway of artemisinin ADH1 ADS CYP71AV1 CYP71AV1 CYP71AV1 Dbr2 ALDH1 ALDH1 FPS Steriods Other sesqut